一、核酸分子具有强烈的紫外吸收
核酸在波长260nm处有强烈的吸收,是由碱基的共轭双键所决定的。这一特性常用作核酸的定性和定量分析。
DNA或RNA的定量
A260= 1.0 相当于
50μg/ml双链DNA(dsDNA)
40μg/ml 单链DNA(ssDNA or RNA)
20μg/ml 寡核苷酸
确定样品中核酸的纯度
纯DNA: A260/A280= 1.8
纯RNA: A260/A280= 2.0
二、DNA变性是双链解离为单链的过程
某些理化因素导致DNA双链互补碱基对之间的氢键发生断裂,DNA双链解离为单链的过程。
DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。
DNA解链时的紫外吸收变化
增色效应(hyperchromiceffect):DNA变性时其溶液OD260增高的现象。
连续加热DNA的过程中以温度相对于A260值作图,所得的曲线称为解链曲线。
解链温度(meltingtemperature,Tm):解链过程中,紫外吸光度的变化达到最大变化值的一半时所对应的温度。
三、变性的核酸可以复性或形成杂交双链
当变性条件缓慢地除去后,两条解离的互补链可重新配对,恢复原来的双螺旋结构,这一现象称为DNA复性(renaturation)。
热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性,这一过程称为退火(annealing)。
核酸分子杂交(hybridization)
不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中,只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系,在适宜的条件可以在不同的分子间形成杂化双链(heteroduplex)。
这种杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成,也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。
核酸分子杂交的应用
研究DNA分子中某一种基因的位置。
监定两种核酸分子间的序列相似性。
检测靶基因在待检样品中存在与否。

