糖链的结构测定
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1.纯度测定
多糖纯品实质上是一定分子量范围的均一组分.
•常用方法:
超离心法 高压电泳法(制成硼酸络合物)
凝胶色谱法旋光测定法(分级沉淀,测比旋度)
2.分子量测定
质谱法FDMS(场解析质谱)
FABMS(快原子轰击质谱)
ESIMS(电喷雾质谱)
MALDI-TOF-MS(基质辅助激光解析电离飞行时间质谱)
3.单糖的鉴定
•全水解
•PC,TLC:与单糖对照品比较-鉴定糖的种类
•薄层扫描:测定单糖的分子比
•气相色谱, HPLC等定性定量分析
4.糖连接位置的测定
气相色谱定性定量分析(游离羟基的部位为糖的连接位置)
1H NMR:全乙酰化,测1HNMR,CHOAc,CHOR, CH2OAc,CH2OR的质子信号化学位移不同
苷化位移
5.糖链连接顺序的确定
部分水解法:稀酸水解,甲醇解,乙酰解,碱水解等
质谱分析:FABMS, FDMS,CIMS等,分析质谱碎片(从外侧糖依次裂解)
13C NMR的弛豫时间:外侧糖的自旋弛豫时间T1比内侧糖大
2D-NMR(H-H COSY,HMQC,HMBC,NOESY,HOHAHA等)
6.苷键构型的确定(a和b型)
核磁共振法;糖端基质子JH1,2,;端基碳JC1,H1和 化学位移
酶解法:分子旋光差法(Klyne法):将苷和苷元的分子旋光差与组成该苷的糖的一对甲苷(a和b型)的分子旋光度比较,数值相近的一个便是与之有相同苷键者
红外法:α葡萄糖苷在770、780 cm-1有强吸收 峰。

