紫外分光光度计/紫外可见分光光度计

紫外分光光度计是根据物质在紫外可见光区的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的手段。

很多化合物在紫外区没有吸收或者只有微弱的吸收，特征性不强，紫外远不如红外有效，但是可作为鉴定化合物方法的补充。

每种物质有其特有的、固定的吸收光谱曲线。可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度判别物质（定性检测）或测定该物质的含量（定量检测）。

紫外光谱提供吸收峰位置和吸收峰强度。

定性检测

与标准物、标准谱图对照：将样品和标准物以同一溶剂配置相同浓度的溶液，并在同一条件下测定，比较谱图是否一致。

比较吸收波长和摩尔吸收系数：样品和标准物的吸收波长（l）和吸收系数（e）均相同，认为是同一物质。

定量检测

定量分析测定样品浓度。

1.应用朗伯-比尔定律计算：

A = ebc，已知样品吸光系数e，测定样品吸光度，代入公式计算c。

2.比较法：

在相同条件下配置样品溶液和标准溶液，在最大吸收波长处测A样，和A标，按照公式    A标/A样 = c标/c样

3.标准曲线法：

配置一系列不同浓度的标准溶液，在最大吸收波长处测标液的吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。在完全相同的条件下测定未知浓度的吸光度，并从标准曲线上求得浓度。改法适用于大批量样品的测定。

仪器

基本结构包括光源、单色器、切光器、参比池、样品池、光电倍增管、检测器以及数据处理及记录系统

光源分为可见光源和紫外光源

可见光源：钨灯，波长范围320~800nm

紫外光源：氘灯，波长范围195~375nm

吸收池：用于盛放待测和参比液

可见光区使用光学玻璃池，紫外区使用石英池

操作

无论选用何种方式测量，都必须遵守以下基本操作步骤

1、链接电源，确保仪器有良好的接地性能

2、通电预热15 min

3、用mode设置检测方式：透射比（T），吸光度（A）

4、选择所需波长

5、将参比样品和北侧样品溶液倒入比色皿，将比色皿放入比色槽。

6、将参比样品置入光路，按BLA或0A/100%T

7、将被测样品置入光路，按Measure或自动显示出吸光值。

8、取出比色皿，关闭仪器，拔掉电源。

注意事项

1、比色皿使用时注意不要沾污或将比色皿的透光面磨损，应手持比色皿的毛面。
2、待测液制备好后应尽快测量，避免有色物质分解，影响测量结果。
3、测得的吸光度A控制在0.2~0.8之间，超过1.0时要做适当稀释。
4、开关试样室盖时动作要轻缓。
5、不要在仪器上方倾倒测试样品，以免样品污染仪器表面，损坏仪器。
6、比色皿在盛装样品前，应用所盛装样品冲洗两次，测量结束后比色皿应用蒸馏水清洗干净后倒置晾干。若比色皿内有颜色挂壁，可用无水乙醇浸泡清洗。
7、向比色皿中加样时，若样品流到比色皿外壁时，用镜头纸擦净后测量。
8、测定紫外波长时，需选用石英比色皿。
9、测量过程中不可打开测量室的窗门，否则会影响测量结果的准确性。