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项目七：HPLC 法测定诺氟沙星胶囊的含量
一、 目的要求：
1. 通过实训掌握高效液相色谱法测定诺氟沙星胶囊含量的原理及操作；
2. 熟悉高效液相色谱法进行含量测定的计算方法及其在药物分析中的应用。
二、实验器材：
实验仪器：高效液相色谱仪、电子天平、容量瓶等；
药品：诺氟沙星胶囊；
试剂：诺氟沙星对照品、环丙沙星对照品、依诺沙星对照品、盐酸等。
三、原理：
高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的 混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由 流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪 或积分记录仪记录，从而达到分离分析的目的。
四、操作步骤：
药典规定，本品含诺氟沙星（C16H18FN3O3 ）应为标示量的 90.0% ~ 110.0%。
1. 色谱条件与系统适用性试验：
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以 0.025mol/L 磷酸溶液（用三乙胺调 节 pH 值至 3.0±0. 1)-乙腈（87:13)为流动相，检测波长为 278nm 。称取诺氟沙星 对照品、环丙沙星对照品和依诺沙星对照品各适量，加 0.lmol/L 盐酸溶液适量使 溶解，用流动相稀释制成每 lml 中含诺氟沙星 25μg、环丙沙星和依诺沙星各 5μg 的混合溶液，取 20μl 注人液相色谱仪，记录色谱图，诺氟沙星峰的保留时间约 为 9 分钟。诺氟沙星峰与环丙沙星峰和诺氟沙星峰与依诺沙星峰间的分离度均应 大于 2.0。
2. 测定法：
取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取细粉适量（约相当于诺氟沙 星 125mg），精密称定，置 500ml 量瓶中，加 0.lmol/L 盐酸溶液 10ml 使溶解后， 用水稀释至刻度，摇匀，精密量取续滤液 5ml ，置 50ml 量瓶中，用流动相稀释 至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取 20μl 注入液相色谱仪，记录色谱图； 另取诺氟沙星对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
五、计算：
六、注意点：
1 、使用液相色谱仪应严格遵守操作规程。
