实验五十六  双盲实验鉴别未知药物

【实验目的】

1．知识目标：陈述M胆碱受体及组胺H₁受体特征，阐述M受体阻断剂、组胺受体阻断剂竞争性拮抗作用特点，分析其相互作用。

2．技能目标：制备豚鼠离体回肠平滑肌标本，学会观察其收缩变化，利用已知的激动药作工具鉴别未知药物。

3．素质目标：通过本实验的学习，体会药物对肠平滑肌受体的竞争性作用与意义，树立竞争意识。

【实验原理】

豚鼠回肠平滑肌分布有M胆碱受体及组胺H₁受体。前者可被Ach激动，后者可为组胺激动，二者均可引起肠平滑肌收缩。此收缩作用可分别被M受体阻断剂、组胺受体阻断剂竞争性拮抗。根据药物对肠平滑肌受体的竞争性作用特点，用已知的激动药作工具，可鉴别相应的受体阻断药。

【材料与方法】

一、实验对象：豚鼠，雌雄不拘，体重250~350g

二、器材、药品：小动物手术器械一套、恒温浴槽、铁支架、双凹夹、试管夹、细丝线、张力换能器、BL－420生物信号采集与处理系统、注射器（1、5、10m1）、烧杯（250m1）。

已知药：乙酰胆碱溶液5×10^-6mol·L^-1

未知药：生理盐水、硫酸阿托品溶液3×10^-6mol·L^-1、磷酸组胺溶液3×10^-6mol·L^-1、盐酸苯海拉明溶液3×10^-5mol·L^-1，分别用A、B、C、D表示

三、方法与步骤

（一）标本制备

取禁食24h的豚鼠1只，击头致死，立即剖腹，在其左下腹找到盲肠，在离回盲瓣2~75px处剪断肠管，取长约7~200px的回肠一段，迅速放入盛有冷台氏液的培养皿中，将肠系膜及脂肪组织分离掉，用镊子夹住肠缘，以5ml注射器（或吸管）吸取台氏液冲洗肠腔内食糜及残渣。然后将肠管剪成1.5~50px长数段，放入盛有新鲜台氏液的培养皿中备用。

取肠管一段，将一端固定于标本板的小钩上，另一端连接在肌力传感器的应变梁上，置于含10m1的乐氏液的玻璃浴槽内，通入95%O₂和5%CO₂混合气体，浴槽内温度恒定在37±1℃，pH为7.3~7.5。使标本负荷lg，平衡30min，其间更换台氏液1~2次。

（二）仪器连接与调试（见第七章实验五图7-5 ）

BL-420系统参数设置：G→100，T→DC，F→30Hz

（三）观察指标

观察给药前后标本收缩变化。

（四）实验要求

1．以小组为单位设计实验步骤，要求以乙酰胆碱为工具药，鉴别未知药物（生理盐水、阿托品、组织胺、苯海拉明）。

2．经老师确认后按设计实验步骤进行实验。

3．比较给药前、后豚鼠回肠平滑肌张力及收缩幅度的变化情况，分析药物的作用及相互作用，鉴别出未知药物。

实验流程：

【注意事项】

1．制备肠段时，动作宜轻柔，勿用手捏。冲洗肠管不能用力过猛，以免使肠管过于膨胀，影响其功能。

2．悬挂肠段不宜在空气中暴露过久，以免影响其活性。

3．肠段一端缝线时，只穿过一侧肠壁，勿将肠腔封住。

【要求与思考】

1．如何利用离体肠平滑肌实验区别拟胆碱药和抗胆碱药或组胺和抗组胺药？并说明其理由。

2．本实验可设计出几套方案，你认为哪套方案最佳。

【作业题】

1．将实验记录的曲线变化值列表。

2．根据实验观察，写出各药的鉴别报告。