• 视频1：离休肠管标本制备

• 视频2：离体平滑肌浴槽使用及注意事项
  

【学习目标】

1.知识目标：通过本实验的学习，能理解小肠平滑肌的一般生理特性。

2.技能目标：能熟练完成平滑肌离体标本的制作和平滑肌灌流方法，并能结合所学知识，对一些现象做出分析。

3.素质目标：学生能综合分析问题、解决问题，能加强团队的协作。

【实验原理】

消化道平滑肌和骨骼肌、心肌一样，也具有兴奋性、传导性和收缩性，有些也具有自律性。相比之下消化道平滑肌的兴奋性低，收缩慢，伸展性大，具有紧张性收缩，对化学物质、温度变化及牵张刺激较敏感等特性。小肠离体后，置于适宜的溶液中，观察其收缩活动及环境变化的对小肠生理特性的影响。

【材料与方法】

一、实验动物：家兔，体重约2~2.5kg。

二、器械、药品：BL-420生物信号采集与处理系统、HW200S/HW201S恒温平滑肌系统，张力换能器（量程为25g以下）、L型通气管、注射器、温度计、培养皿、烧杯、螺丝夹、三维调节器、台氏液、0.01%去甲肾上腺素、0.01%乙酰胆碱、1mol/LNaOH溶液、lmol/L HCl溶液、2%CaCl₂溶液。

三、方法与步骤

（一）标本制备  用手提起家兔，用木槌猛击兔头枕部，使其昏迷，立即剖开腹腔，找出胃幽门与十二指肠交界处。由此取长20~750px的肠管。先将与该肠管相连的肠系膜沿肠缘剪去，再将拟取肠管两端分别用线结扎，于结扎两端内侧剪断，取出肠段置于台氏液中轻轻漂洗，当肠内容物基本洗净后，将肠管分成数段，每段长2-75px，两端各系一条线，保存于供氧的38℃左右的台氏液中（若不供氧，则应保存于室温台氏液中，同时肠管的一半暴露于空气中）。

（二）仪器连接与调试

实验装置连接（如图4-2）将HW200S/HW201S恒温平滑肌系统温度设定在38℃左右。实验前将台氏液加入预热管及实验管（灌流浴槽）高度的2/3处，打电源开关，使其加热，同时指示灯亮（若恒温控制失灵时，需用温度计随时探测灌流浴槽中的温度）。熟悉更换液方法。将肠段一端系在L型通气管底端固定钩上，另一端与张力换能器相连，保持连线垂直，并不得与浴槽管壁接触，以免磨擦影响记录，将换能器连接于生物信号采集与处理系统的输入端口。调节HW200S/HW201S恒温平滑肌灌流系统空气旋钮，控制通气量，使空气从通气管前端呈单个而不是成串逸出，以免振动悬线影响记录。

图4-2 标本连接示意图

BL-420系统的使用

1．选择“实验项目”中的“消化实验”选中“消化道平滑肌生理特性”。也可以在输入信号中选择张力换能器所连接的通道，在信号选择上，选择张力信号，然后开始实验。

2．相关参数设置的参考值：时间常数（t）→DC，高频滤波（F）→30Hz，显速→4.00s/div，增益→100g

3．用鼠标左键单击工具条上的“开始”按钮，调节参数至波形幅度、密度适当，待收缩曲线稳定后，单击记录按钮。

（三）观察指标：

观察小肠平滑肌自动收缩曲线节律、频率、波形和幅度。

【观察项目】

1．待标本稳定10~30min后，记录小肠平滑肌收缩的对照曲线。

2．乙酰胆碱的作用  用滴管吸入0.01%乙酰胆碱溶液，向灌流浴槽内滴1~2滴。观察到明显效应后，立即从排水管放出浴槽内含乙酰胆碱的台氏液，加入新鲜预热台氏液，由此反复冲洗2~3次，以洗涤或稀释残留的乙酰胆碱，使之达到无效浓度，待小肠运动恢复后进行下一项。

3．去甲肾上腺素的作用按上述方法将0.01%去甲肾上腺素加入浴槽内1~2滴，观察给药后小肠平滑肌运动曲线。当效果明显后，立即更换台氏液。

4．氯化钙的作用

（1）用37℃无Ca²⁺的台氏液冲洗肠管2~3次，换上新鲜37℃无Ca²⁺的台氏液，观察小肠平滑肌运动曲线有何变化。

（2）更换掉无钙台氏液，恢复含Ca²⁺台氏液，观察小肠平滑肌运动曲线变化。

（3）用吸管加2%CaC1₂溶液2~3滴入灌流浴槽内，观察其反应，效果明显后迅速冲洗2~3次。

5．盐酸的作用加1~2滴1mol/LHCl溶液入浴槽内，观察小肠运动的变化。

6．氢氧化钠的作用在（5）基础上加等容量的1mol/LNaOH溶液入浴槽内，观察小肠运动的变化。按上述方法更换台氏液，反复冲洗。

7．温度的影响将浴槽内台氏液放出，注入25℃台氏液，观察平滑肌收缩有何改变，当效应明显后再换入38℃台氏液，持续一段时间后，再换入42℃台氏液，观察收缩活动的变化（亦可根据室温的具体情况选做其中的一项）。

【实验结果】

测量实验结果，剪辑打印曲线，自行设计表格填入实验结果。

【注意事项】

1．实验过程中必须保证标本的供氧（通气）及浴槽内台氏液的恒温（38℃），以维持标本活性。

2．灌流浴槽内的液面高度应保持恒定。

3．放大器零点调好后不要再移动旋钮，以免影响基线。

4．上述各药液加入的量系参考数据，效果不明显者可以添加。

5．每次实验效果明显后立即放掉含药液的台氏液，并冲洗多次，以免平滑肌出现不可逆反应。

6．各项处理必须有处理标记。

实验流程：

【要求与思考】

1．课前复习生理学“消化道平滑肌生理特性”理论教学内容和台氏液的成份、酸碱度及用途。

2．预测观察项目中各项处理的预期结果。

3. 取肠管时为什么采用击昏家兔而不用在麻醉下进行?

4．分别打印自主活动和化学因素影响下肠肌收缩曲线，以便观察分析。

5．制备小肠平滑肌标本时，为什么要取小肠上段，尤其是十二指肠段的平滑肌？

6．结合你对本实验方案的理解和机能实验室条件，你认为本实验中应观察哪些指标？

7．如何从记录曲线中观察分析小肠平滑肌的生理特性？若出现非预期现象分析其原因。

【作业题】

1．从记录曲线中观察比较小肠平滑肌与心肌、骨骼肌的收缩特性有何不同?说明其原理。

2．通过观察分析记录曲线变化，阐明各项处理引起的收缩频率、收缩强度和张力变化的机理。

3．结合本章的实验内容，谈谈观察与思维在实验研究中作用与体会。