一、实验原理

用不同的方法和不同的染料处理染色体标本，可使每条染色体上出现明暗相间或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique），在众多的显带技术中（Q带、G带、R带、T带和N带），G显带是应用最广泛的一种技术。G显带是指人染色体标本经胰蛋白酶等试剂处理后，再用Giemsa染色，可使每条染色体都有其较为恒定的G带带纹特征，这可较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。关于G显带的机理还不十分清楚，一般认为染色体上与DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带；而那些组蛋白和DNA结合牢固的区段可被染成深带。易着色的阳性带为含AT多的染色体节段，相反，GC多的染色体节段则不易着色。

 二、材料、器材与试剂

1、材料：人外周血染色体标本片（白片，标本片龄不超过30天为宜）。

2、器材：显微镜、烤箱、恒温水浴箱、染色缸、镊子、标本片片架。

3、试剂：

⑴0.02%胰蛋白酶溶液：称取200mg胰蛋白酶溶于10ml生理盐水中即为2.0%的胰蛋白酶原液，－20℃保存。取0.5ml原液加49.5ml生理盐水混匀，用5.0％NaHC0 ₃调pH至7.0，配成0.02%工作液，随配随用。

⑵0.85%NaCl溶液：称取8.5克NaCl溶于1000ml双蒸水。

⑶5.0％NaHC0₃溶液：配制方法见实验四。

⑷1/15mol/L磷酸缓冲液：配制方法见实验四。

⑸Giemsa染液：配制方法见实验三。

 三、内容与方法

㈠胰蛋白酶消化法

1、预先将常规方法制好的人染色体标本片（未染色的白片，片龄最好在3~7天）置37℃烤箱中处理3小时。新鲜片子则需在60℃烤箱烤片2~8小时。

2、预先将配好的0.02%的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预温。

3、将标本片浸入胰酶工作液中，轻轻晃动2~60秒钟（精确的处理时间根据片龄等因素而定）。

4、立即取出用pH6.8的磷酸缓冲液漂洗两次或直立于吸水纸上数秒钟。

5、用Giemsa染液染色10~15分钟，自来水冲片、晾干。

6、镜检：在低倍镜下选择分散良好、长度适中的分裂相转换油镜观察，若染色体未出现带纹，则为显带不足；若染色体边缘发毛为显带过头，此时应根据具体情况增减胰蛋白酶处理时间重新处理一张标本。

㈡注意事项

1、G显带的好坏取决于染色体制片的质量，制出的片以分裂相较多、染色体分散为好，以早中期为宜，且染色体要较长。因此必须注意控制秋水仙素的浓度和作用时间，一般情况下每毫升培养液含0.02~0.05微克作用4~5小时，所得结果比较满意。

2、每次显带均应试胰酶工作液处理时间，以决定正确的显带时间。应多观察几个分裂相，不能仅凭1~2个分裂相的显带效果判定所有片的处理时间。

3、胰蛋白酶在室温下容易混浊失效，必须分装小瓶在冰箱中保存。

4、标本保存时间不宜太长，时间越长，细胞对胰蛋白酶处理的抵抗性越强。