第二章液相色谱仪学习指导
一、要求
本章重点掌握在HPLC中的Van Deemter方程式，影响板高的因素，影响分离度的因素，化学键合相与 化学键合相色谱，反相色谱与正相色进的区别，反相色谱中影响溶质保留的因素.定量分析方法。
理解反相色谱的保留机理，吸附色谱、反相离子对色谱和离子抑制色谱的原理。
一般了解高效液相色谱仪主要部件、分离方法的选择。
二、小结
1. 从经典液相色谱发展至HPLC，技术上有3方面突破，采用高压泵输液、采用高效填料以及高灵敏度 检测器，从而使HPLC具有高效、高速、高灵敏度等特点。
2. HPLC中范氏方程可知，降低板高的途径有:①降低颗粒直径,可达高效高速，最有效;②降低流动相的黏度，可提高，而降低③提高装柱技术而降低降低流速。
3. 提髙分离度的方法，在正相、吸附色谱中，要增加容量因子，流动相的极性要降低，在反相色谱中，正好相反。要改变分配系数比，主要通过改变流动相和固定相的选择性来达到目的。
4. 主要色谱类型
| 类型
| 同定相
| 流动相
| 组分流出顺序 |
| 反相色谱 | ywg-c18(ods) | 甲醇一水乙腈一水
| 极性大的组分先流出
|
| 正相色谱 | ywg_cn(nh2) | 有机溶剂 | 极性小的组分先流出 |
| 吸附色谱 | YWG | 有机溶剂 | 极性小的组分先流出 |
| 反相离子对色谱 | ODS含有反离子 | 甲醉一水 | 不易形成离子对的离子先流出 |
| 离子抑制色谱法 | ODS | —定pH的甲醉一水 | 易解离的酸碱先流出 |
5. 反相色谱中影响溶质保留的因素:①反相键合相的烃基键长;②有机溶剂的比例•，③流动相的pH; ④流动相的盐浓度。
6. HPLC仪的主要部件为高压泵、进样阀、色谱柱、检测器。对高压泵要求是恒流，脉动小，常用的是往复泵。色谱柱常用的尺寸是(2〜6) mmX(10〜25) cm,检测器常用的有紫外、荧 光、电化学以及蒸发光散射。
思考题
1. 名词解释
键合相填料与键合相色谱正相色谱与反相色谱反相离子对色谱与离子抑制色谱YWG ODS梯度洗脱光电二极管阵列紫外检测器保留时间
2. 与气相色谱法相比，高效液相色谱有哪些优点和不足？
3. 在HPLC中，提高柱效可考虑哪些途径？
4. 在HPLC中，提高分离度的方法有哪些？
5. 什么是梯度洗脱？与程序升温有什么不同？
6. 在HPLC中，对流动相有何要求？如何选择各种色谱类型流动相？
7. 请预测在正相色谱与反相色谱体系中，组分的出峰次序。
8. 在高效液相色谱中，组分和溶剂分子之间存在哪几种作用力？
9. 简要说明HPLC仪的组成及主要部件。
10. 为了测定邻氨基苯酚中微童杂质苯胺，现有下列同定相:硅胶、ODS键合相，下列流动相:水一甲醇、异丙醚一己烷，应选用哪种固定相、流动相，为什么？
