（一）概念

1. CLSI EP17-A定义的空白限（LoB）：在规定的可能条件下，空白样品被观察到的最大检测结果，如果数据呈正态分布，LoB相当于该分布单侧95%的上限。

2. 检出限（LoD）：给定测量程序具有适当的确定检出分析物的最小浓度或量。

3. 定量检出限：在声明的实验条件下能够得到可靠结果的样品中分析物的最低浓度（可报告的最低限值），并在该浓度下的总误差符合要求（临床应用可接受）。

4. 分析测量范围：又称测量区间或工作范围，指标本不做任何处理测量程序所能给出准确结果的范围。对于两点校准的测量程序也称线性范围。

5.临床可报告范围：是指定量检测项目向临床能报告的检测范围，患者样本可经稀释、浓缩或其他预处理。

6. 参考区间：介于或包含于两个参考限之间的范围。一般指从参考下限到参考上限的间隔值。在某些情况下可能仅有一个参考限，通常是上限x，相应的参考区间则为（0～x）或≤x。

（二）CLSI EP17-A中检出限的建立和验证步骤

1. 试验样品：制备两种样品，即空白样品和低浓度样品，应尽可能做到两种样品均为天然样品。

2. 测量次数：在确认实验时至少需要测量60份次（包括空白样品和低浓度样品）。在验证实验时，至少需要测量20份次。

3. 进行相关统计学原理进行数据分析。

4. 使用参考物质核实正确度的可接受性判断。  

（三）可报告范围评价的实验标本要求

1. 实验标本：建议直接用患者标本，而尽量少用参考物质或质控物。  

2. 标本数量：验证厂商声明的AMR最好有5个或以上的系列浓度标本；建立线性范围时，需9～11个标本。  

3. 标本测定：全部试验应在尽量短时间内、最好在同一工作日内完成；分析序列应随机排列；每份标本测量2～4次，计算平均值。   

（四）临床可报告范围评价的步骤

1. CRR的下限常通过定量检出限或功能灵敏度确定，CRR上限常通过最大稀释度试验确定。

2. CRR上限常通过最大稀释度试验确定：

（1）确定测量低限：选择浓度在线性范围内的高值标本3份，用AFP稀释液进行稀释，计算回收率，回收率=（实测值/预期值）×100%，观察回收率超过可接受范围的情况，以确定标本稀释后可靠测量浓度。

（2）确定稀释倍数：选择初检超过线性范围上限的高值血清标本，确定最大稀释倍数；经测量后计算回收率；观察回收率超过可接受范围的情况。

（3）确定临床可报告范围：CRR上限为线性范围上限乘以最大稀释度，下限为功能灵敏度或定量检出限。

（五）建立参考区间的步骤

1. 个体的纳入与排除：建立纳入和排除标准；设计调查表和书面知情同意书，参考个体完成调查表。

2. 参考个体数的确定和分组：参考上、下限90%、95%、99%置信区间，所需参考个体数分别为120、153、198。对于严重偏态分布的结果，参考个体数可以高达700个。

3. 标本采集与测量：做好采样前的各项准备工作；正确收集和处理标本，处理方式须与为患者进行的实际常规操作一致；在良好的控制条件下，用事先指定的方法对处理好的标本进行检测，获得参考值结果。

4. 参考区间的统计学处理：

（1）参考限的确定：对于大多数检验项目，常选择参考值数据95%的分布范围表示参考区间。参考区间即2.5%～97.5%位数所在的区间。

（2）参考限的可信区间：参考限的置信区间就是参考限值的可能分布范围，通常选择置信水平为90%时参考限值的分布宽度。增加参考个体的样本量可提高参考区间估计的精度。

（3）离群值的识别和处理：参考值数据中的疑似离群点，可通过1/3规则进行判断。

（4）确定参考区间的方法：1） 参数法：2） 非参数法：3）Robust方法。

（5）参考区间分组：分组与否主要依据临床意义和该项目的生理变异以及统计学分析。

（六）参考区间的验证

对引用厂商和其他实验室或经参考区间转移获得的参考区间，实验室可通过主观评定、小样本和大样本参考个体进行参考区间的验证。

1. 主观评定：通过认真审查原始参考值研究的有关因素评价其可接受性。

2. 小样本（约 20例）参考个体的验证：20个参考个体应合理地代表该实验室选择的健康群体。检测结果用D/R比值或者Tukey规则进行离群值检验。剔除离群值并用新的参考个体代替，以确保有20例测量结果。

3. 大样本（约60例）参考个体的验证：与小样本（约 20例）参考个体的验证程序类似，在剔除离群值之后，通过z检验将实验数据与待引用的参考区间进行比较，如果结果无统计学差异，可引用参考区间，否则应考虑建立自己的参考区间。