（四）核酸的理化性质、变性和复性及其应用

1．核酸的一般理化性质

多元酸，具有较强的酸性；DNA是线性分子，黏度极大，在机械力下易断裂。

DNA、RNA在260nm处有紫外吸收峰。

OD260＝1．0相当于50μg／ml双链DNA；40μg／ml单链DNA（或RNA）；20μg／ml寡核苷酸。

OD260／OD280＝1．8时DNA为纯品；OD260／OD280＝2．0时RNA为纯品。

2．DNA的变性　在某些理化因素作用下，DNA互补碱基对之间的氢键断裂，双链解开，变为单链。

（1）增色效应：解链过程中，DNA的OD260增加，并与解链程度有一定的比例关系。

融解温度（Tm）：DNA变性时，紫外吸收值达到最大值的50%时的温度——DNA的解链温度。

Tm＝69．3＋0．41（G＋C）%

＜20bp的寡核苷酸：Tm＝4（G＋C）＋2（A＋T）

Tm正比于（G＋C）%、分子长度；Tm值可作为衡量DNA样品均一性的标准；介质的离子强度高时，融解温度的范围小。

3．DNA的复性与分子杂交

复性：变性DNA在适当条件下，两条互补链可重新恢复天然的双螺旋构象。

退火（annealing）：热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性。

核酸分子杂交（hybridization）：在复性过程中，不同的DNA或DNA和RNA之间形成互补双链（局部的碱基互补配对）。