实验四　转氨基作用

目的

氨基酸的转氨基作用几乎在体内各组织均能进行。本实验通过将肝脏和肌肉组织进行比较，说明不同的组织器官ALT的活性不同。

原理

丙氨酸和α－酮戊二酸经血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化，生成丙酮酸和谷氨酸。

丙酮酸与2，4－二硝基苯肼作用，生成丙酮酸－2，4－二硝基苯腙，在碱性条件下呈红棕色，其颜色深浅与酶的活性成正比。

器材

恒温水浴箱、试管。

试剂

1.0.1mol/L　Na₂HPO₄溶液　磷酸氢二钠17.8g溶于水中，并加水至1　000 ml冰箱内保存。

2.0.1mol/L　KH₂PO₄溶液　磷酸二氢钾13.6g溶于水中，并加水至1　000ml冰箱内保存。

3.pH　7.4缓冲液　取0.1mol/L　Na₂HPO₄溶液80.8ml和0.1mol/L KH₂PO₄溶液19.2ml混匀。

4.GPT基质液　精确称取1.78g　DL－丙氨酸和29.2mgα－酮戊二酸，先溶于10ml　1mol/L氢氧化钠中，溶解后，以1mol/L　HCl调节到pH　7.4，置冰箱保存。

5.2，4－二硝基苯肼溶液　称取20mg　2，4－二硝基苯肼，溶于100ml　1mol/L盐酸中。

6.0.4mol/L氢氧化钠溶液　将16.0g氢氧化钠溶于水中，并加水至1　000ml。

操作

1.将家兔处死后，立即取出肝和肌肉，用生理盐水洗去血液。取10g新鲜肝和肌肉，分别剪碎，加pH　7.4缓冲液10ml研碎成匀浆后再加pH　7.4缓冲液20ml混匀，过滤，即为肝和肌肉浸提液。

2.取两支试管，按下表操作。

比较两管颜色，说明哪种组织转氨酶活性高，并解释原因。

（李平国）