实验三　肝中酮体的生成作用

目的

通过实验证明肝中酮体的生成作用。

原理

利用丁酸作为底物，与新鲜肝匀浆（含有肝组织中的酮体生成酶系）混合后保温，即有酮体生成。酮体中的乙酰乙酸和丙酮可与显色粉中的亚硝基铁氰化钠起反应，生成紫红色化合物：

经同样处理的肌肉匀浆不产生酮体，因此无显色反应。

器材

试管、试管架、滴管、匀浆器或研钵、恒温水浴箱、离心机或小漏斗、白瓷反应板、解剖器材。

试剂

1.0.9%氯化钠溶液

2.洛克氏（Locke）溶液　氯化钠0.9g、氯化钾0.042g、氯化钙0.024g、碳酸氢钠0.02g、葡萄糖0.1g，将上述各试剂混合溶于蒸馏水中，溶解后加水至100ml。

3.0.5mol/L丁酸溶液　取44.0g丁酸溶于0.1mol/L氢氧化钠溶液中，溶解后用0.1mol/L氢氧化钠稀释至1　000ml。

4.pH　7.6磷酸缓冲液（1/15mol/L）　量取1/15mol/L磷酸氢二钠溶液86.8ml和1/15mol/L磷酸二氢钠溶液13.2ml混合即可。

5.15%三氯醋酸溶液

6.显色粉　亚硝基铁氰化钠1g，无水碳酸钠30g，硫酸铵50g，混合后研碎。

操作

1.肝匀浆和肌匀浆的制备：取小白鼠一只，断头处死，迅速剖腹取出肝和肌肉，剪碎后分别放入匀浆器中，加入生理盐水（按重量∶体积为1∶3），制备成匀浆（或在研钵内充分研磨成匀浆）。

2.取四支试管，编号后按下表加入各种试剂。

3.将各管摇匀，放置于37℃恒温水浴箱中保温40分钟。

4.取出各管，分别加入15%三氯醋酸20滴，混匀后用离心机离心5分钟（3　000转/分）。

5.用滴管吸取上述四支试管的滤液（或上清液）各10滴，分别放置白瓷反应板的4个凹孔中，然后向各凹孔内加显色粉0.1g（约1小匙），观察所产生的颜色反应。

思考题

分析上述实验结果，说明酮体生成和利用的部位。