实验二　酶的专一性及影响酶促反应的因素

目的

通过本实验，验证酶对底物催化的专一性，以及pH、温度、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。

原理

唾液淀粉酶能专一地催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖、葡萄糖。麦芽糖或葡萄糖都属于还原糖，能使班氏试剂中的二价铜离子（Cu^2＋）还原成亚铜，并生成砖红色的氧化亚铜（Cu₂O）。淀粉酶不能催化蔗糖水解，且蔗糖本身不是还原糖，所以不能与班氏试剂作用呈色。以此证明酶催化底物的专一性。

淀粉或淀粉的水解产物遇碘会呈现不同的颜色，淀粉遇碘变蓝色；糊精遇碘则根据其分子量的大小依次呈现紫色、褐色、红色；而麦芽糖、葡萄糖遇碘不呈色。通过颜色变化可以了解淀粉酶在不同条件下水解淀粉的程度，以观察pH、温度、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。

器材

试管、试管夹、样品杯、滴瓶、温度计、恒温水浴箱、煮沸水浴箱、冰箱等。

试剂

1.1%淀粉溶液　称取可溶性淀粉1g，加5ml蒸馏水调成糊状，徐徐倒入80ml煮沸的蒸馏水中，不断搅拌，待其溶解后，加蒸馏水至100ml。此液应新鲜配制，防止细菌污染。

2.1%蔗糖溶液　称1g蔗糖，加蒸馏水至100ml溶解。

3.pH　6.8缓冲液　取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液154.5ml，0.1mol/L柠檬酸溶液45.5ml混合即可。

4.pH　5.0缓冲液　取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液515ml，0.1mol/L柠檬酸溶液485ml混合即可。

5.pH　8.0缓冲液　取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液972ml，0.1mol/L柠檬酸溶液28ml混合即可。

6.班氏试剂　溶解结晶硫酸铜（CuSO₄·5H2O）17.3g于100ml热的蒸馏水中，冷却后加水至150ml为A液。取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g，加蒸馏水600ml，加热溶解，冷却后加水至850ml为B液。将A液缓慢倒入B液中，混匀即可。

7.稀碘液　称取碘1g、碘化钾2g，溶于300ml蒸馏水中。

8.0.9%NaCl溶液

9.0.1%CuSO₄溶液

10.0.1%Na₂SO₄溶液

11.稀释唾液的制备　用清水漱口，清除食物残渣。再含蒸馏水30ml作咀嚼运动，2分钟后将稀释唾液收集于样品杯中备用。

操作

1.酶的专一性　取两支试管，编号，按下表操作。

2.pH对酶促反应速度的影响　取三支试管，编号，按下表操作。

3.温度对酶促反应速度的影响　取三支试管，编号，按下表操作。

4.激活剂、抑制剂对酶促反应的影响　取四支试管，编号，按下表操作。

思考题

通过试验，解释pH、温度、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。