【附录Ⅸ】　溶血素的制备

一、原理

绵羊红细胞作为异种抗原注入家兔体内，可刺激家兔的免疫系统产生针对绵羊红细胞的抗体，通过分离家兔血清而制备出兔抗绵羊红细胞抗体，即溶血素。

二、材料

(1)家兔一只，体重2～3kg。

(2)抗原——全羊血及20％羊红细胞悬液红细胞悬液的制备:静脉抽取羊血，阿氏液保养。加入适量生理盐水，2000r/min离心5min，吸去上清液，连续洗涤3次，以便除去表面的血清蛋白等附着物。最后一次洗涤离心10min，以使血细胞密集管底，此时上清液应透明无色，弃去上清液，即为洗涤过的红细胞，后用生理盐水配成20％的浓度即可。

(3)无菌注射器及针头、无菌试管及毛细吸管、平皿等。

三、方法

1.免疫方案:

按下列程序进行免疫。

2.试血:

按上诉程序注射完毕后，第三天即可采血，测试血清抗体效价，溶血效价可达1∶20000。

3.采血:

将家兔仰卧固定，心前区剃毛，消毒皮肤，从心脏直接抽血。

4.分离血清:

将血液注入无菌平皿中，凝固后，置37℃1h，用无菌毛细吸管吸出血清，置无菌试管中，3000r/min离心15min，除去红细胞。