【附录Ⅷ】　免疫血清的制备

一、原理

各种抗原均可刺激动物体产生相应抗体，抗原的种类很多，包括颗粒性抗原如细菌悬液、红细胞等，可溶性抗原如类霉素、血清蛋白等。抗原进入机体后可刺激机体的免疫系统，免疫细胞接触抗原后，多细胞间协同作用，最后使B细胞活化，并分化为浆细胞，由浆细胞合成特异性抗体，抗体存在于血清中，分离得到的动物血清即为含有特异性抗体的免疫血清。本实验以H型伤寒杆菌和痢疾杆菌为抗原制备其相应免疫血清。

二、材料

(1)健康雄性家兔，体重2～3kg。

(2) H型伤寒杆菌和痢疾杆菌菌液。

(3)无菌注射器及针头、无菌试管及毛细吸管、平皿等。

三、方法

1.免疫方案

(1) H型伤寒杆菌免疫血清按下列程序进行免疫

(2)痢疾杆菌免疫血清按下列程序进行免疫

2.试血:

末次注射后第7天即可采血，测试血清效价。取耳静脉血1ml，分离血清，用上述菌液做凝集试验，若效价在1∶2000以上即可采血。

3.放血:

抗血清经测试效价符合要求时应及时放血。最简单的方法是从心脏抽血，将家兔仰卧固定，心前区剃毛，消毒皮肤，从心脏抽血，一般家兔抽取50ml以下仍能生存，如不需保存动物，可抽100ml左右。

4.分离血清:

将所抽血液注入无菌平皿或大试管中，置37℃1h，使其凝固，用无菌玻棒将血块与容器内壁分开，置冰箱24～48h，待血块收缩后，用无菌毛细吸管吸出血清置无菌试管中，如血清中混有红细胞，可以3000r/min离心15min除去，整个过程应避免污染。

5.分装及保存:

将分离的血清中加入适量的叠氮钠或硫柳汞，以每管0.5～1.0m l分装，冰箱保存备用。