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菌种于使用前先在琼脂斜面上传代一次，然后接种于琼脂斜面培养基中，37℃培养24h后收集菌苔，称重、用pH6.4磷酸盐缓冲液配成100mg/ml菌液。经70℃水浴1h杀菌，放置4℃冰箱备用。

2. pH6.4 1/15mol/L磷酸盐缓冲液(沙伦生PBS)

甲液:无水Na₂HPO₄9.46g溶于1000ml蒸馏水。

乙液:无水KH₂PO₄9.078g溶于1000ml蒸馏水。

然后取甲液27ml，乙液73ml，加NaCl 0.5g即成。

3.瑞(Wright)氏染液

瑞氏染粉0.1g，甲醇60ml，先将染粉置研钵内加少量甲醇研磨，然后加入全部甲醇。配好的染液要装瓶塞紧，置二周后使用。

4. 6％可溶性淀粉肉汤

取肉汤培养基100ml，加入可溶性淀粉6g，混匀后煮沸灭菌，冷却后置4℃冰箱保存(只能保存一周)。使用时37℃水浴溶解。

5. 1％鸡红细胞悬液

取肝素抗凝鸡血1ml，加生理盐水99ml混合。

6.细菌悬液的配制

无菌吸取5ml pH6.4，1/15mol/L PBS加到细球菌培养管中，置室温5～10min。旋转培养管，制成菌悬液。用分光光度计(波长640nm)测定并调整细菌细胞浓度达到透光率为30％～40％。

7.溶菌酶标准液的配制

称取溶菌酶标准纯品，pH6.4，1/15mol/L PBS配成1000μg/m l(1ng/m l)，置冰箱冻存。临用时再稀释成100μg/ml，50μg/ml，25μg/ml，10μg/ml。

8. 1.5％琼脂的配制

秤取1.5g琼脂，用含0.01％柳硫汞的生理盐水100ml溶解，加热使之呈液体状。

9. 0.01mol/L pH7.2PBS的配制

先配制0.2mol/L Na₂HPO₄及NaH₂PO₄溶液，取72ml 0.2mol/L Na₂HPO₄与28ml0.2mol/L NaH₂PO₄混合，然后用0.85％NaCl溶液稀释20倍即成。

10.免疫琼脂板制备(供单向琼脂扩散试验用)

将适宜浓度的人Ig抗血清与预先融化好的1.5％琼脂在56℃水浴中混匀，每板内灌注3.3ml，制成琼脂板(IgG、IgA、IgM)，并做好标记。然后用3mm的打孔器在琼脂板上打孔，孔距1～1.5cm。孔内琼脂用注射器针头挑出。

11.琼脂反应板的制备(供双向琼脂扩散试验用)

取融化好的1％盐水琼脂3.3ml，置琼脂板内，待冷即制成琼脂反应板。

12.琼脂反应板的制备(供免疫电泳用)

将载玻片置水平台面，并将塑料条置于玻片上面，然后取4ml融化好的1％琼脂糖倒于玻片上，待自然冷凝后取出塑料条，即成琼脂槽。最后根据需要在琼脂板上打孔，挑去孔内琼脂。

13.琼脂板制备(供对流免疫电泳用)

以吸管取琼脂4m l趁热倒在载玻片上，琼脂凝固后即成离子琼脂板，然后按图14-1打孔，用注射器针头挑出孔内凝胶，再用热融琼脂封闭孔底，然后将琼脂板置于电泳槽中，槽两侧搭纱布或滤纸作盐桥。

14.琼脂板制备(供火箭电泳用)

将抗体血清按一定比例与融化好的1.5％琼脂在56℃水浴中混匀，迅速浇注成2 mm厚的琼脂板。

15.制备含抗IgG抗体的琼脂板(供单向琼脂扩散用)

将抗血清稀释后与预先融化的琼脂在56℃水浴中混匀，倾注于玻片上，制成厚度0.15cm的免疫板，琼脂最终浓度为15％，待琼脂凝固后，用打孔器在免疫板上打孔，孔径为3mm，孔距1.2～1.5cm。琼脂孔要求圆整、光滑。

16.缓冲盐水(pH7.4)

取NaCl 75g，1mol/L HCl 177ml，三乙醇胺28ml，MgCl₂·6H₂O 1.0g，CaCl₂·2H₂O 0.2g。先将NaCl溶于700ml蒸馏水中，再加入HCl和三乙醇胺。将MgCl₂·6H₂O和CaCl₂·2H₂O分别用2ml蒸馏水溶解后，逐一加入，再用蒸馏水加至1000ml，4℃保存。临用前取上述溶液1份加9份蒸馏水，4℃保存待用。

新鲜脱纤维羊血或Alsever液保存羊血(4℃可保存3周)用生理盐水洗2次，第三次用缓冲盐水，2000r/min离心30min。取压积红细胞以缓冲盐水配成2％悬液。为使浓度标准化，可将2％SRBC悬液用缓冲盐水稀释25倍，用分光光度计(542nm)测定透光率(以缓冲盐水校正透光率至100％)。每次实验用红细胞浓度(透光率)必须一致。

2％SRBC加等量2单位溶血素，混匀，置37℃水浴10min。

19. 50％溶血标准管

取2％SRBC悬液0.5ml，加入蒸馏水4.5ml，混匀。

多用RPM I1640。按说明书配制后抽滤除菌，临用前加入20％无菌NBS、PHA 50～200μg/m l、青霉素100U/ml、链霉素100U/ml。

PEG 6000-80004.0g、NaF 1.0g、Na₂HPO₄·12H₂O 10.15g、NaH₂PO₄·2H₂O 1.0g、NaN₃0.1g，加蒸馏水至100ml。

22.系列标准管准备(供免疫浊度试验用)

用生理盐水稀释人IgG标准品或人血清IgG工作标准，使其浓度分别为5.5g/L、11.0g/L、22.0g/L、44.0g/L(浓度可根据不同制剂略有变动)。取上述IgG标准液10μl，分放于4支试管中;另取生理盐水10μl，放于第5支试管中，作为空白对照。分别做好标记。

23. 2％绵羊红细胞制备

将脱纤维绵羊红细胞用缓冲液离心洗涤3次，末次用2000r/min离心10min，取压积红细胞用缓冲液配成2％。

24. 50％溶血标准管(供总补体活性测定用)

2％绵羊红细胞2ml加蒸馏水8ml，混匀，即为全溶血管。取全溶血管液2ml加缓冲液2ml，即为50％溶血标准管。

25. pH7.4巴比妥缓冲液配制

①贮存液:巴比妥5.75g、巴比妥钠3.75g、NaCl85.00g、MgCl₂·6H₂O1.02g、CaCl₂0.17g。

上述成分逐一加入热蒸馏水中，溶解后补加蒸馏水至2000ml，过滤，4℃冰箱保存。

②应用液: 1份贮存液加4份蒸馏水配制而成。12h内使用。

26. 0.01mol/L PBS(pH7.0)制备

A液(0.2mol/L): NaH₂PO₄·H₂O 27.6g，加蒸馏水至1000ml。

B液(0.2mol/L): Na₂HPO₄·12H₂O 71.6g，加蒸馏水至1000ml。

A液16.5ml，B液33.5ml，NaCl 8.5g，加蒸馏水至1000ml。

27. 1％磷酸盐缓冲盐水(PBS)琼脂配制

按每100ml pH6.4磷酸盐缓冲盐水加入1.5 g琼脂配置。

28. pH9.6 0.05mol/L碳酸盐缓冲液

4℃保存，不超过两周，用于稀释包被的抗原或抗体。

29. pH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲盐水:

4℃保存，不超过2周，用于洗涤。再加入小牛血清至0.2％可用于稀释血清和酶结合物。

30. pH5.0磷酸——柠檬酸缓冲液

取a液24.3ml＋ b液25.7ml，再加入DDW 50ml即可，用于稀释底物溶液。

31.反应终止液(供ELISA用)(2mol/LH₂SO₄)

将H₂SO₄缓缓加入H₂O中，边加边搅动，用前配置。

32.底物溶液(供ELISA用)

用前临时配置。

33. TBS(pH7.6 0.05mol/L Tris-HCl)

Tris30.25g，NaCl 40.0g，HCl 11ml，加蒸馏水至500ml溶解，调pH值至7.4～7.6。抗体稀释用含1％牛血清白蛋白的TBS。

34. Mayer苏木精复染液

苏木精0.1g，钾明矾5g，柠檬酸0.1g，水合氯醛5g，碘酸钠0.02g，蒸馏水100ml。将苏木精、钾明矾和碘酸钠溶于蒸馏水，再加温搅拌溶解，加柠檬酸和水合氯醛，混合后煮沸5min，冷却后过滤备用。

35. 1％磷酸盐缓冲盐水(PBS)琼脂

按每100m l，pH6.4磷酸盐缓冲盐水加入1.5g琼脂配置。