实验48　小鼠DTH实验

(DTH test in mice)

【目的】

了解小鼠DTH试验的原理和方法。

【原理】

小鼠经BSA-FcA抗原皮下注射后，体内产生致敏的淋巴细胞，再经相同抗原攻击，经24～48h后，在注射抗原的局部发生迟发型超敏反应。

【材料】

1.LACA小鼠两只。

2.抗原与佐剂乳化剂:无菌BSA溶液(浓度为30mg/ml)与FcA(福氏完全佐剂)以1∶7体积混合，研磨，直至抗原与佐剂的混合物浮水面呈油滴状，不散开。

3.热凝聚BSA(ABSA)制备:用2％BSA经过滤除菌，加热(71～72℃，80min)，冷却后，2000r/min离心10min，取沉淀，再用无菌生理盐水洗一次，恢复原体积一半。

【方法】

1.免疫:在小鼠尾根部皮下，分二点，一次注射BSA-FCA乳化液各10μl，对照组注射等体积生理盐水。

2.攻击:在免疫后10～14d以2％ABSA溶液攻击，每只鼠的左后足垫注射30μl，右后足垫注射30μl生理盐水，24h后测量左右足垫的厚度。

【结果】

1.肿胀厚度测量:处死小鼠，用游标卡尺测量每只小鼠的左、右后足垫的厚度，以其差值表示肿胀程度。

2.重量测量法:在一定的解剖部位剪下左、右后足垫，分别称其重量，以差值表示肿胀程度。

3.病理学检查法:剪下足垫以福尔马林液固定，制切片，用苏木精-伊红染色后，镜下观察单核细胞浸润情况。

【思考题】

在判断迟发型超敏反应所出现的结果时，应考虑些什么?