实验22　B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)测定

(Determination of B-lymphocyte Surface Membrane Immunoglobulin)

【目的】

了解B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)测定的方法和原理。

【原理】

SmIg是B细胞的抗原识别受体，也是B细胞特异的表面标志，用直接免疫荧光法可检查出SmIg并鉴定B淋巴细胞。用荧光素标记的抗Ig抗体，在一定条件下与淋巴细胞混合，荧光素标记的抗Ig抗体可以与B细胞表面的Ig结合，在荧光显微镜下观察可见B细胞膜上出现荧光。

【材料】

1. ICR小鼠。

2.异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗小鼠Ig抗体(购自BD公司)。

3.Hanks液: pH7.4(内含0.1％NaN₃)。

4.台式离心机。

5.离心管、吸管、移液管等。

【方法】

1.采用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖取出脾脏放入盛有6ml Hanks液的平皿中，用100目钢网研磨，混匀。从中吸取1ml细胞悬液放入一试管中，加满Hanks液，1000r/min离心10min，洗涤细胞一遍。倾去上清液，沉积的细胞恢复1m l容积，即为约1×10⁷/ml的细胞悬液。另取一支试管，吸取1×10⁷/ml的细胞悬液0.4ml加Hanks液3.6ml，即为1×10⁶/ml的细胞悬液。

2.取2ml离心管两支，各加入1×10⁶/ml的细胞悬液1ml，用台式离心机2000r/min离心3min，弃去上清液。一支加入荧光素标记的兔抗鼠Ig抗体100μl，另一支不加抗体作对照，置4℃冰箱30min。

3.取出离心管，用Hanks液洗涤细胞两次，以去除游离的抗体，最后一次离心后弃去上清液，留少许回流液，混匀，滴片，用荧光显微镜观察。

【结果】

荧光显微镜观察，照射激发光下SmIg阳性细胞可见环状或斑点状荧光。用钨丝灯光源透射光照明计数同一视野内淋巴细胞总数，共计数200～300个淋巴细胞，算出其中SmIg阳性细胞的百分数。

【注意事项】

在滴片前要彻底去除游离的抗体，以避免假阳性结果。

图22-1　B淋巴细胞膜表面免疫球蛋白分子模式图

【思考题】

1. B淋巴细胞与T淋巴细胞的膜表面标志有什么区别?

2. B淋巴细胞有哪些膜表面标志?