生物化学实验指导
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1.1前 言
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1.2第一章 糖类鉴定和定量测定
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1.2.1第一节 糖类的鉴定和分析方法
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1.2.1.1实验一 糖的呈色反应和定性鉴定
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1.2.1.2实验二 糖类的薄层层析鉴定
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1.2.1.3实验三 Smith降解法测定糖链的序列
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1.2.2第二节 糖类定量测定方法
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1.2.2.1实验四 总糖和还原糖的测定(一)<br />——费林试剂热滴定法
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1.2.2.2实验五 总糖和还原糖的测定(二)<br />——3，5-二硝基水杨酸法
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1.2.2.3实验六 还原糖的测定(三)<br />——铁氰化钾法
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1.2.2.4实验七 还原糖的测定(四)<br />——高锰酸钾滴定法(Bertrand法)
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1.2.2.5实验八 碘量法测定葡萄糖的含量
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1.2.2.6实验九 蒽酮比色法测定可溶性糖含量
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1.2.2.7实验十 邻甲苯胺法测定血糖的含量
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1.2.2.8实验十一 糖原的测定
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1.3第二章 脂类
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1.3.1第一节 脂肪提取和测定
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1.3.1.1实验一 粗脂肪的提取和测定
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1.3.1.2实验二 卵磷脂的提取及鉴定
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1.3.2第二节 脂类的鉴定方法
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1.3.2.1实验三 薄层层析法分析膜磷脂
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1.3.2.2实验四 脂类染色法
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1.3.3第三节 油脂的化学性质
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1.3.3.1实验五 油脂酸价的测定
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1.3.3.2实验六 脂肪碘值的测定
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1.3.3.3实验七 油脂皂化值的测定
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1.3.3.4实验八 油脂羟值的测定
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1.3.3.5实验九 油脂过氧化值的测定
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1.3.3.6实验十 油脂总羰基价的测定
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1.3.4第四节 血清中脂类的测定
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1.3.4.1实验十二 血清胆固醇的测定
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1.3.4.2实验十三 血清中甘油三酯的测定
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1.3.4.3实验十四 血清中磷脂的测定
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1.3.4.4实验十五 酶法测定血清中游离脂肪酸
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1.4第三章 蛋白质
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1.4.1第一节 蛋白质含量的测定
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1.4.1.1实验一 紫外吸收法测定蛋白质含量
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1.4.1.2实验二 Folin酚法(Lowry法)测定蛋白质的含量
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1.4.1.3实验三 考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白质含量
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1.4.1.4实验四 BCA法测定蛋白质含量
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1.4.2第二节 蛋白质的纯度和亚单位的检测
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1.4.2.1实验五 连续的非变性凝胶电泳法
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1.4.2.2实验六 不连续SDS-PAGE垂直电泳及考马斯亮蓝染色法
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1.4.2.3实验七 SDS-PAGE蛋白凝胶的酸性银染法
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1.4.2.4实验八 蛋白免疫印迹法
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1.4.2.5实验九 等电聚焦测定蛋白质等电点
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1.4.3第三节 蛋白质的分类纯化
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1.4.3.1实验十 蛋白质盐析分离
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1.4.3.2实验十一 分子筛法对蛋白质脱盐
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1.4.3.3实验十二 DEAE纤维素柱层析纯化酶蛋白
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1.4.3.4实验十三 亲和层析<br />——镍柱纯化分离天然状态的带有His标签的蛋白质
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1.4.3.5实验十四 TCA法和丙酮法沉淀浓缩蛋白质
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1.5第四章 酶学实验
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1.5.1第一节 常见酶活力的测定
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1.5.1.1实验一 水解酶活性的测定><br />——以淀粉酶为例
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1.5.1.2实验二 氧化还原酶活性的测定<br />——以乳酸脱氢酶为例
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1.5.1.3实验三 转移酶活性的测定<br />——以谷丙转氨酶为例
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1.5.1.4实验四 异构酶活性的测定<br />——以葡萄糖异构酶为例
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1.5.1.5实验五 裂解酶活性的测定<br />——以醛缩酶为例
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1.5.2第二节 酶的动力学研究 ——以酵母蔗糖酶为例
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1.5.2.1实验六 酵母蔗糖酶的粗酶制备过程<br />——研磨水抽提、热处理和乙醇沉淀
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1.5.2.2实验七 蔗糖酶活力的测定和比活力的分析
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1.5.2.3实验八 蔗糖酶的盐析和凝胶层析脱盐
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1.5.2.4实验九 DEAE纤维素柱层析纯化蔗糖酶
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1.5.2.5实验十 底物浓度对催化反应速度的影响及米氏常数K<sub>m</sub>
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1.5.2.6实验十一 用正交法测定几种因素对蔗糖酶活力的影响
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1.6第五章 代谢产物的鉴定和测量
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1.6.1第一节 代谢产物的定性鉴定
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1.6.1.1实验一 糖酵解中间产物的鉴定
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1.6.1.2实验二 肌糖原的酵解作用
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1.6.1.3实验三 ATP的生物合成的测定
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1.6.1.4实验四 纸层析法定性检测氨基移换反应
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1.6.1.5实验五 生物氧化的电子传递实验
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1.6.1.6实验六 脂肪转化为糖的定性实验
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1.6.1.7实验七 激素对血糖浓度的调控作用
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1.6.2第二节 代谢产物的定量测定
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1.6.2.1实验八 脂肪酸的β-氧化<br />——酮体测定法
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1.6.2.2实验九 氨基转换作用的测定(分光光度法)
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1.6.2.3实验十二 乙酰-肟法测定血清尿素氮
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1.7第六章 核酸类实验
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1.7.1第一节 核酸的提取和鉴定
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1.7.1.1实验一 琼脂糖凝胶电泳检测DNA
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1.7.1.2实验二 RNA的变性琼脂糖凝胶电泳
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1.7.1.3实验三 质粒DNA的碱裂解法提取与纯化
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1.7.1.4实验四 植物组织中DNA的提取
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1.7.1.5实验五 酵母RNA的分离与鉴定
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1.7.1.6实验六 动物肝脏DNA的提取与纯化
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1.7.2第二节 核酸的定量测定
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1.7.2.1实验七 紫外吸收法测定核酸的含量
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1.7.2.2实验八 定磷法测定核酸的含量
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1.7.2.3实验九 二苯胺法测定DNA的含量
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1.7.2.4实验十 地衣酚(苔黑酚)法测定RNA的含量
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1.8附 录
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1.8.1一 生物化学实验室规则
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1.8.2二 实验误差
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1.8.3三 实验室安全知识
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1.8.4四 关于有毒化学药品的知识
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1.8.4.1(一)高毒性固体
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1.8.4.2(二)毒性危险气体(附表3)
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1.8.4.3(三)毒性危险液体和刺激性物质
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1.8.4.4(四)其他有毒物质
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1.8.4.5(五)致癌物质
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1.8.4.6(六)具有长期积累效应的毒物
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1.8.4.7(七)溴化乙锭溶液的净化处理
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1.8.4.8(八)实验操作中对所用的特殊化学试剂应注意的安全事项
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1.8.5五 生物化学实验室基本知识和操作
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1.8.5.1(一)玻璃仪器的洗涤、清洁与干燥
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1.8.5.2(二)清洗液的原理与配制
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1.8.5.3(三)吸量管的种类和使用
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1.8.5.4(四)容量瓶及量筒
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1.8.5.5(五)滴定管
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1.8.5.6(六)易变质及需要特殊方法保存的试剂(附表8)
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1.8.5.7(七)溶液的配制
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1.8.5.8(八)溶液的混匀
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1.8.5.9(九)过滤
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1.8.6六 生物化学实验常用仪器的使用
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1.8.6.1(一)722S型分光光度计的使用方法
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1.8.6.2(二)UV/VIS-5100紫外-可见分光光度计的使用
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1.8.6.3(三)酸度计的使用
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1.8.6.4(四)离心机的使用
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1.8.6.5(五)可调式微量移液器的使用
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1.8.7七 生物化学实验常用数据及参数
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1.8.7.1(一)硫酸铵饱和度的计算表
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1.8.7.2(二)常用酸、碱的密度和浓度(附表17)
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1.8.7.3(三)氨基酸的主要参数(附表18)
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1.8.7.4(四)常用蛋白质相对分子质量标准参照物(附表19)
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1.8.7.5(五)核酸、蛋白质换算数据
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1.8.8八 缓冲液的配制
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1.8.8.1(一)常用缓冲溶液的配制
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1.8.8.2(二)酸度计用的标准缓冲液的配制
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1.8.9九 常用酸碱指示剂(附表28)
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1.8.10十 层析技术有关介质性质及数据
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1.8.10.1(一)离子交换纤维素(附表29)
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1.8.10.2(二)常见离子交换树脂的有关性质(附表30)
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1.8.10.3(三)葡聚糖凝胶的有关技术数据(附表31)
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1.8.10.4(四)聚丙烯酰胺凝胶的有关技术数据(附表32)
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1.8.10.5(五)琼脂糖凝胶的有关技术数据(附表33)
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1.8.10.6(六)各种凝胶所允许的最大操作压(附表34)