实验六　还原糖的测定(三)
——铁氰化钾法

【实验目的】

掌握铁氰化钾测定还原糖的原理和方法。

【实验原理】

待测样品中原有的和水解后产生的转化糖都具有还原性质，在碱性溶液中能将铁氰化钾还原，根据铁氰化钾的浓度和检验滴定量可计算出含糖量。其反应式如下:

C₆H₁₂O₆+6K₃Fe(CN)₆+6KOH→(CHOH)₄·(COOH)₂+6K₄Fe(CN)₆+4H₂O

滴定终点时，稍过量的转化糖即将指示剂次甲基蓝还原为无色的隐色体。此时颜色消失。反应如下:

【药品试剂】

1．1%的次甲基蓝指示剂。

2．盐酸(水解作用)。

3．10%和30%的NaOH溶液。

4．1%铁氰化钾:置棕色瓶中保存。每次使用前按下述方法标定铁氰化钾的浓度。准确称取经105℃烘干并冷却之后的蔗糖1 g，用少量水溶解并移入500 ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。取出此液50 ml于100 ml容量瓶中，加盐酸5 ml摇匀，置65～70℃水浴上加温30分钟，取出，迅速冷却至室温。用30%氢氧化钠溶液中和，加水至刻度，摇匀，倒入滴定管中。

吸取已配制好的铁氰化钾溶液5 ml于150 ml三角瓶中，加入2．5 ml 10%氢氧化钠溶液、12．5 ml水和洁净的玻璃珠数个，于石棉网上加热至沸腾，保持1分钟。然后加入次甲基蓝指示剂1滴，立即以糖液滴定至蓝色消失为止，记录用量。正式滴定时，先加入比预实验少0．5 ml的糖液，煮沸1分钟，加入次甲基蓝指示剂1滴，再用糖液滴定至无色。

按下述公式计算铁氰化钾的浓度:

式中:

C——相当于5 ml铁氰化钾溶液的转化糖的重量(g);

V——滴定时消耗糖液的体积(ml);

W——称取的蔗糖重量(g);

1000——稀释比;

0．95——换算系数(1 g蔗糖可转化为0．95 g转化糖)。

【实验器材】

滴定管、容量瓶、三角瓶等。

【实验方法】

1．称取样品5～10 g(视含糖量多少而增减)，用200 ml左右的水洗入250 ml容量瓶内(样品中如含有较多的蛋白质、色素、胶体等可逐渐加入20%醋酸铅溶液10～15 ml，至沉淀完全为止，并加入10～15 ml 10%磷酸二氢钠溶液，至不再产生沉淀为止)。加水至刻度，摇匀过滤。

2．吸取滤液50 ml于100 ml容量瓶中，按上述铁氰化钾标定方法进行转化、中和及滴定(以样液代替糖液，其余操作相同)。

按下述公式计算总糖含量:

总糖(以转化糖计，%)

式中:

A——相当于5 ml铁氰化钾溶液的转化糖的重量(g)。

V——滴定试样液消耗体积(ml)。

W——样品的重量(g)。

250——定容体积(ml)。

50/100——滤液50 ml稀释成100 ml。

【注意事项】

1．当滴定到达终点时，过量的转化糖将指示剂次甲基蓝还原为无色的隐色体，这种隐色体容易受空气中氧所氧化，很快又变成指示剂的颜色。

2．整个过程应在低温电炉上进行，这样重现性好、准确、误差小。滴定要迅速，否则终点不明显。

【思考题】

用铁氰化钾法测定食品中的还原糖时，向样品中加入铁氰化钾溶液后再加热，是否会引起还原糖水解?为什么?