第二节　聚合酶链反应技术

聚合酶链反应(Polymerase chain reaction，PCR)技术是一种高效、快速、特异、敏感的体外DNA扩增技术。通过PCR扩增，使靶基因中特异性DNA序列呈百万倍地增加，迅速获取大量的单一核酸DNA片段，易于其分析和鉴定。这项技术的建立极大地推动了生命科学的研究进展，并已应用于寄生虫的检测、鉴定。

PCR技术是利用靶DNA上的特定区域，设计并合成一段寡核苷酸引物进行酶促反应，以合成特定的DNA序列。将DNA扩增引物(通常含20～30bp)和靶DNA、脱氧单核苷酸(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、DNA聚合酶(Taq酶)、Mg²⁺经高温(94℃±)变性、低温(56℃±)退火和中温(72℃±)延伸后，DNA聚合酶沿引物和模板(靶)DNA复合物由5'端向3'端延伸，从而合成新的引物延伸链。该链又可作为下一轮循环反应的模板。如此反复变性、退火和延伸20个循环后，可使待测的模板DNA拷贝数达百万倍。扩增产物经电泳、染色后在紫外灯下可见特异性DNA区带。也可不经电泳，采用PCR－ELISA技术进行检测。

通过PCR检测寄生虫DNA特异性片段，可区别虫种或其型，灵敏度可达1个寄生虫。本法除可用于寄生虫病的诊断外，还可考核疗效和作虫种变异研究，尤适于大规模流行病学调查。PCR用于弓形虫P30基因和B1基因的检测，敏感性可达0.5pg的鼠弓形虫DNA。PCR结合核酸杂交技术用于恶性疟原虫的检测也取得了很好的效果。