二、脑脊液标本的微生物学检验

通过分析问题背景资料，采用恰当的方法采集合适的临床标本做细菌学检验，并对检验结果做出合理解读，为临床抗菌药物合理使用提供依据。具体内容包括：脑脊液标本的采集方法和注意事项；脑脊液标本的涂片检查；脑脊液标本培养前的处理方法；脑脊液标本中未知细菌的分离与鉴定；脑脊液标本检出细菌的药敏实验；脑脊液标本检验报告的发送。

（一）问题背景资料

张某某，男，26岁，11天前无明显诱因出现全身乏力，不伴头痛、恶心、呕吐、发热，自以为“感冒”，在当地诊所输液3天（具体用药不详）后，患者全身乏力好转，5天前再次出现乏力，伴头痛、恶心、呕吐、发热，体温达38℃，不伴肢体抽搐，自行口服藿香正气液、维C银翘片、扑热息痛片，病情未较前明显好转，今日头痛加重，就诊于某院急诊科。入院查体，体温36.7℃、呼吸21次/分、脉搏71次/分、血压128/74 mmHg、血氧饱和度100%，双肺呼吸音粗，未闻及干、湿性啰音。心率71次/分，律齐，未闻及杂音。腹软。专科检查：意识清楚，言语清晰，双侧瞳孔等大等圆，直径约3.0 mm，对光反射灵敏，双眼球各方向活动到位，双侧鼻唇沟对称，伸舌居中，四肢肌力5级，肌张力适中，四肢腱反射（+），双侧巴氏征（+）。双侧肢体浅痛觉对称、灵敏。颈软，双侧克氏征（+）。

请以上述病例资料为背景进行本次实验设计。

（二）实验设计提示

1.标本采集与送检

1）标本采集　分析症状指征和疾病指征，采用恰当的方法采集合适类型的标本。

2）标本送检　标本采集后，室温条件下应在2 h内送至微生物实验室。

2.细菌学检验

1）检验程序　根据采集标本类型绘制检验流程图。

2）检验方法

（1）显微镜检查：墨汁负染色检查、固定染色检查（革兰染色、抗酸染色等）。

（2）培养和鉴定：标本的前处理（离心涂片接种）；根据标本类型选择合适的接种方法；需氧菌的分离培养、厌氧菌的分离培养、其他细菌的分离培养、病原菌的识别和鉴定。

（3）药敏实验：请参照最新版CLSI M100文件。

（4）脑脊液标本中常见病原菌见表23-2。

表23-2　脑脊液标本中常见病原菌

3.报告与解释

（1）阳性结果报告：包括显微镜检查结果和培养结果。

（2）阴性结果报告：包括显微镜检查结果和培养结果。

（3）阳性或阴性报告结果解释。

4.实验器材和试剂

根据上述设计内容列出完成本次实验所需实验器材和试剂。

（三）思考题

（1）脑脊液标本的采集和送检培养需注意哪些？

（2）如何提高外观清亮或微浊的脑脊液中病原体的检出率？