四、隐球菌属

（一）临床意义

隐球菌属中对人致病的最主要的是新生隐球菌及其变种，一般引起外源性感染，主要侵犯肺、脑以及脑膜。新生隐球菌病好发于细胞免疫功能低下者，如艾滋病、恶性肿瘤、糖尿病、器官移植患者及大剂量使用糖皮质激素者。

（二）新生隐球菌的检验程序

新生隐球菌的检验程序见图15-12。

图15-12　新生隐球菌的检验程序

（三）目的要求

掌握新生隐球菌的形态、培养特性和鉴定要点。

（四）器材与试剂

1.菌种　新生隐球菌。

2.培养基　沙保弱培养基，血琼脂平板，各种糖发酵及同化实验培养基，尿素琼脂培养基等。

3.试剂　乳酸酚棉蓝染液，革兰染液，优质墨汁等。

4.其他　盖玻片、载玻片、滴管等。

（五）步骤与方法

1.形态观察

（1）标本墨汁负染色直接镜检：新生隐球菌性脑膜炎患者脑脊液离心后的沉淀物做墨汁负染色，镜下观察菌体与荚膜特点。

（2）新生隐球菌培养物染色镜检：取新生隐球菌培养物制片，经乳酸酚棉蓝或革兰染色，镜下观察其菌体和芽生孢子特点。

2.分离培养　将新生隐球菌接种于沙保弱培养基或血琼脂平板上，25℃或37℃培养2～3天，观察菌落特点。

3.鉴定实验

（1）糖同化及发酵实验：无菌操作挑取新生隐球菌培养物分别接种于葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖发酵管中，37℃培养2～3天，观察结果；并同时做这四种糖的同化实验（具体方法参照实验十四相关内容）。

（2）脲酶实验：将新生隐球菌接种于尿素琼脂培养基上，37℃培养2～3天，观察结果。

4.结果

（1）菌体形态结构：在黑色背景下可镜检到圆形透亮菌体，芽生孢子，细胞外有一层宽厚的透亮荚膜。新生隐球菌（墨汁负染色）见图15-13。

（2）菌落特点：新生隐球菌在沙保弱培养基和血琼脂平板上菌落为酵母型，初为白色奶油状，表面黏稠，随着时间的延长，菌落逐渐转为黏液样，颜色渐变为淡褐色。新生隐球菌菌落形态见图15-14。

图15-13　新生隐球菌（墨汁负染色）

图15-14　新生隐球菌菌落形态

（3）生化反应：新生隐球菌不能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和乳糖；能同化葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，不能同化乳糖；能分解尿素，使培养基呈红色。

（六）注意事项

新生隐球菌在25℃或37℃下培养皆生长良好，而非病原性隐球菌在37℃时不生长。

（七）思考题

（1）临床上对新生隐球菌性脑膜炎患者如何进行快速病原学诊断？

（2）新生隐球菌与白假丝酵母菌的菌落特点有何区别？