二、气单胞菌属

（一）临床意义

气单胞菌属为水生生态系统中的常居菌。与人类疾病相关的主要是嗜水气单胞菌、豚鼠气单胞菌、威隆气单胞菌等。常引起肠道感染，多见于夏季。临床表现最常见为急性水样腹泻。气单胞菌的致病因子有肠毒素、侵袭和黏附因子，前者引起腹泻的临床症状，后者则使细菌进入和定植于宿主体内。少数情况下也可引起伤口感染、菌血症、心内膜炎、脑膜炎等肠道外感染性疾病。

（二）气单胞菌的检验程序

气单胞菌检验程序见图8-2。

图8-2　气单胞菌检验程序

（三）目的要求

（1）掌握气单胞菌的涂片染色镜检形态，在常用培养基上的菌落形态、生化反应及鉴定依据。

（2）熟悉气单胞菌的常用鉴定实验和检验程序。

（四）器材与试剂

1.菌种　嗜水气单胞菌。

2.培养基　血琼脂平板、MAC琼脂平板、CIN琼脂平板、碱性琼脂平板、TCBS琼脂平板、MIU培养基、含盐肉汤（0%、3%、7%、10%NaCl）、赖氨酸脱羧酶培养基、鸟氨酸脱羧酶培养基、精氨酸双水解酶培养基、氨基酸对照培养基。

3.试剂　氧化酶试剂、硝酸盐还原试剂、3%过氧化氢溶液、吲哚试剂、革兰染液、无菌液体石蜡、蒸馏水。

4.其他　O/129药敏纸片（10 μg/片及150 μg/片）等。

（五）步骤与方法

1.分离培养　将嗜水气单胞菌接种在血琼脂平板、MAC琼脂平板、CIN琼脂平板、TCBS琼脂平板上，35℃培养18～24 h，观察细菌生长情况。在血琼脂平板上可见灰白色或淡灰色、光滑、湿润、不透明、凸起，直径约2 mm的菌落，菌落周围可见狭窄的β溶血环；在MAC琼脂平板上呈无色、半透明、光滑湿润、边缘整齐的菌落；在CIN琼脂平板上，菌落呈粉红色中心，边缘清晰、不均匀；在TCBS琼脂平板上不生长。嗜水气单胞菌在各种培养基上的菌落形态见图8-3与表8-3。

表8-3　嗜水气单胞菌在各种培养基上的菌落形态

2.涂片染色镜检　挑取嗜水气单胞菌菌落，涂片、革兰染色，油镜下可见革兰染色阴性，杆状或球杆状，末端钝圆，不规则排列的细菌。嗜水气单胞菌革兰染色镜检形态见图8-4。

3.生化反应

气单胞菌属氧化酶实验阳性，触酶实验阳性，硝酸盐还原实验阳性。气单胞菌属主要生化反应见表8-4。

图8-3　嗜水气单胞菌在血琼脂平板及MAC琼脂平板上的菌落形态

图8-4　嗜水气单胞菌革兰染色镜检形态

表8-4　气单胞菌属主要生化反应

注：A表示酸；K表示碱；C表示枸橼酸盐利用实验。

除以上生化反应外，气单胞菌属细菌的其他鉴定实验如下。

1）O/129敏感实验　气单胞菌属对150 μg/片的O/129耐药。

2）耐盐实验　实验原理、方法及结果判断见弧菌属细菌部分。气单胞菌属细菌可在无盐培养基上生长，借此可与弧菌属细菌鉴别。

（六）注意事项

（1）氧化酶实验及触媒实验应选用已知该实验阳性和阴性的标准菌株做对照。

（2）硝酸盐还原实验：如硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物，会出现假阴性结果，应在试管内加入少量锌粉，出现红色为阴性，不产生红色则视为硝酸盐还原实验阳性。

（七）思考题

（1）气单胞菌属可用哪些鉴定实验与弧菌属细菌相鉴别？

（2）气单胞菌属可用哪些鉴定实验与肠杆菌科细菌相鉴别？

（薛　丽）