四、沙门菌属

（一）临床意义

沙门菌属中对人致病的为伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌，其余多为人和动物共患病的病原菌。人类因食用患病或带菌动物的肉、乳、蛋或被病畜排泄物污染的食物而感染。沙门菌是引起消化道感染的常见病原菌，可致伤寒、副伤寒、败血症、食物中毒。

（二）伤寒沙门菌的检验程序

伤寒沙门菌的检验程序见图6-4。

图6-4　伤寒沙门菌的检验程序

（三）目的要求

（1）掌握沙门菌属的检验程序和检验方法。

（2）熟悉沙门菌属检验的报告方法。

（四）器材与试剂

1.菌种　伤寒沙门菌，甲、乙副伤寒沙门菌。

2.培养基　SS培养基、EMB培养基或MAC培养基、KIA培养基、MIU培养基、O/F培养基、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、枸橼酸盐培养基、硝酸盐培养基等。

3.试剂　靛基质试剂、甲基红试剂、V-P试剂、氧化酶试剂、肥达反应试剂、沙门菌属诊断血清、3%过氧化氢溶液、革兰染液等。

4.其他　显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、生理盐水、试管、吸管等。

（五）步骤与方法

1.分离培养　将沙门菌属细菌分别接种在SS、EMB等肠道选择培养基上，35℃培养18～24 h观察结果。由于本菌不发酵乳糖，故在SS、EMB琼脂平板上为无色、半透明光滑型小菌落，产生硫化氢的细菌可在SS琼脂平板上形成中心带黑褐色的小菌落。

2.涂片染色镜检　取沙门菌属细菌培养物涂片、革兰染色镜检，为G-杆菌，鞭毛染色标本，镜下可见周鞭毛。

3.生化反应　从SS琼脂平板上挑取单个菌落分别接种于O/F、KIA、MIU及硝酸盐培养基等35℃培养18～24 h观察结果，同时做氧化酶实验，触酶实验，靛基质、甲基红及V-P实验，观察并记录结果，最终鉴定需做全面生化反应及血清学鉴定。

4.血清学鉴定　用沙门菌诊断血清与待检菌做玻片凝集实验。

（1）先用A-F多价O血清与待检菌做玻片凝集实验，如凝集，则分别用群特异性O血清（O2、4、7、9……）与待检菌做玻片凝集实验，确定并记录O抗原型别以定群。

（2）用该群内H抗原第1相抗血清与待检菌做玻片凝集实验，确定凝集后记录H抗原的第1相抗原型别以定型（种）。

（3）根据记录的O、H抗原型别，查沙门菌属抗原组成表，以确定待检菌的血清型和菌名。

（4）如果沙门菌属的抗原组成表有2种以上的血清型抗原与本次实验的分离株相同，则需凝集第2相H抗原，确定凝集，记录结果，查沙门菌属抗原组成表，以确定待检菌的血清型和菌名。

（5）如果仍有2种以上的血清型抗原组成相同，则需参照抗原组成表中推荐的补充生化反应进行鉴定。

（6）若生化反应典型，但与A-F多价O血清不凝集，则待检菌可能有Vi抗原存在，需刮取菌苔用生理盐水配成浓菌液，100℃水浴加热30 min，再重复步骤（1）～（5），以确定菌株的血清型和菌名，如果仍然与A-F多价O血清不凝集，则可能为非A-F群沙门菌。

（六）注意事项

（1）临床菌落观察应仔细，不要漏检靠近发酵乳糖型菌落周边的可疑菌落。

（2）生化反应典型而不与A-F多价O血清凝集者，要考虑Vi抗原的存在。

（3）如血清学鉴定能定群，但又不能用单因子血清定型者，要想到鞭毛变异的可能性。

（吕厚东　李秀真）