二、肺炎克雷伯菌

（一）临床意义

肺炎克雷伯菌是克雷伯菌属中重要的条件致病菌，可存在于人类鼻咽部和肠道内。好发于免疫力低下的人群，在临床上可致多部位、多脏器的感染，常见的有肺炎、支气管炎、泌尿道和创伤感染等，有时还可引起严重的败血症、脑膜炎、腹膜炎等。

（二）肺炎克雷伯菌的检验程序

肺炎克雷伯菌的检验程序见图6-2。

（三）目的要求

（1）掌握肺炎克雷伯菌的生物学特性及其培养鉴定法。

图6-2　肺炎克雷伯菌的检验程序

（2）熟悉肺炎克雷伯菌检验的报告方法。

（四）器材与试剂

（1）示教片　肺炎克雷伯菌荚膜染色片。

（2）菌种　肺炎克雷伯菌。

（3）培养基　血琼脂平板、EMB琼脂平板、KIA及MIU培养基、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、枸橼酸盐、尿素培养基等。

（4）试剂　革兰染液、靛基质试剂、甲基红试剂、V-P试剂、生理盐水等。

（5）其他　载玻片、接种环、酒精灯、显微镜等。

（五）步骤与方法

1.分离培养　将肺炎克雷伯菌接种于血琼脂平板和MAC等肠道选择鉴别培养基，经37℃18～24 h孵育，取血琼脂平板上灰白色大而黏稠的菌落涂片、染色镜检，然后移种于KIA、MIU、IMViC培养基及其他生化反应培养基。

2.涂片染色镜检　取培养物菌落涂片、革兰染色镜检，可见革兰阴性短杆菌，有明显的荚膜。

3.生化反应　氧化酶阴性，KIA：AA+-。IMViC：--++。MIU：--+。苯丙氨酸脱氨酶、鸟氨酸脱羧酶均为阴性。

4.荚膜肿胀实验　方法是将该菌接种于促进荚膜生长的华-佛（Worfel-Ferguson）液体培养基，经37℃18～24 h孵育后，取1滴培养物于载玻片上，向其上加墨汁或美蓝染液1滴，再加1接种环特异性抗血清，混合后加盖玻片，于油镜下观察。同时用不加抗血清的做空白对照。加抗血清者菌体周围空白圈明显大于空白对照者为阳性。

（六）注意事项

（1）培养基中的蛋白胨可影响甲基红实验的结果，每批蛋白胨使用之前要用已知甲基红实验阳性菌株和阴性菌株做质量检测。甲基红反应并不因增加葡萄糖的浓度而加快，孵育时间不得少于48 h，过早判断结果可造成假阴性。

（2）克雷伯菌属与邻近菌属的鉴别主要是动力实验和鸟氨酸脱羧酶实验。临床上区别肺炎克雷伯菌与产酸克雷伯菌二者的实验为吲哚实验，前者为阴性，后者为阳性。

（七）思考题

（1）肺炎克雷伯菌的亚种及其临床意义是什么？

（2）肺炎克雷伯菌的菌落特点是什么？