三、肠球菌属

（一）临床意义

肠球菌广泛分布于自然界，是人、动物肠道的正常菌群，也可栖居于女性生殖道。肠球菌所致感染最多见于泌尿道感染，多与泌尿道器械操作、留置导尿、尿路结构异常及抗菌药物不规范使用有关，是重要的医院感染病原菌，腹腔和盆腔感染及肛周脓肿时也是常见的感染菌，但如果标本留取不合格时，它也是常见的污染菌，因此在临床诊断前应认真评估分离菌的临床意义。医院内肠球菌属感染的标本中分离最多的是粪肠球菌，其次是屎肠球菌，属内其他种分离率较低。

（二）肠球菌属的检验程序

肠球菌属检验程序见图5-6。不同的临床样本，分别采取相应的处理方式。

（三）目的要求

1.掌握　肠球菌属的形态及培养特性。

2.掌握　肠球菌属的主要鉴定依据，尤其是粪肠球菌和屎肠球菌的鉴定。

3.应用　用于临床各类标本中肠球菌的分离与鉴定。

（四）器材与试剂

1.菌种　粪肠球菌、D群链球菌等。

图5-6　肠球菌属检验程序

2.培养基　血琼脂平板、血清肉汤、胆汁七叶苷、6.5%氯化钠肉汤、M-H琼脂平板等。

3.试剂　3%过氧化氢溶液、革兰染色试剂、PYR试剂。

4.其他　接种环、载玻片、加样枪、无菌枪头、酒精灯、光学显微镜、生物安全柜、培养箱等。

（五）步骤与方法

1.分离培养　将上述样本以分区划线方式分别接种于血琼脂平板及中国蓝琼脂平板上，置于35℃、5%～10%二氧化碳培养箱中培养24～48 h，观察、记录细菌生长情况及菌落形态特征。

肠球菌在血琼脂平板上菌落光滑，为灰白色、圆形、稍凸起、不透明的菌落，多呈α溶血，也可呈β溶血或不溶血。肠球菌属在中国蓝琼脂平板上不生长。

2.涂片染色镜检　将上述菌落涂片，革兰染色，油镜下观察细菌的染色性及形态特征并记录。肠球菌镜下呈单个、成双、短链或成簇排列的卵圆形、革兰阳性球菌。用尿液、脓液、胸腔积液、腹腔积液、血液标本直接涂片，革兰染色镜检中肠球菌较链球菌稍大，排列可呈中长链状。

3.生化反应

1）触酶实验　挑取肠球菌的培养物进行触酶实验，原理、方法及结果判断见葡萄球菌属中相关内容。肠球菌属触酶实验阴性。

2）胆汁七叶苷实验

（1）原理：有的细菌可在胆盐中生长并分解七叶苷，生成黑色或棕褐色的化合物。

（2）方法：分别将肠球菌、D群链球菌接种于胆汁七叶苷生化反应微管中，35℃培养箱中孵育18～24 h后观察结果。

（3）结果判断：生化微管中培养基变为黑色或棕褐色为阳性，不变色者为阴性。肠球菌属胆汁七叶苷实验阳性。

3）6.5%NaCl生长实验

（1）原理：有的细菌能在6.5%NaCl中生长，使培养基变混浊，若培养基中已加入溴甲酚紫指示剂，可使培养基中葡萄糖分解产酸，而使培养基变为黄色。

（2）方法：将待检菌接种于6.5%NaCl生化反应微管中，35℃培养箱中孵育18～24 h后观察结果。

（3）结果判断：生化微管中培养基变混浊，或已加入溴甲酚紫指示剂的培养基变为黄色者为阳性，不变色者为阴性。肠球菌属能在6.5%NaCl中生长。

4）PYR实验　挑取肠球菌的新鲜培养物进行PYR实验，原理、方法及结果判断见链球菌属中相关内容。肠球菌属PYR实验阳性。

临床常见肠球菌的主要鉴定特征见表5-5。

表5-5　常见肠球菌属种间鉴定

注：V表示反应不定。

（六）注意事项与小结

（1）进行胆汁七叶苷实验和6.5%NaCl生长实验时，培养基中接种菌量不能太小，否则易致假阴性。若接种量太大，细菌不需要生长而足以造成七叶苷分解或使葡萄糖产酸，导致假阳性结果。因此，以接种2～4个菌落为宜。

（2）有条件的实验室可通过质谱分析或测序技术进行菌种鉴定。

（七）思考题

（1）肠球菌鉴定与鉴别常用实验有哪些？

（2）粪肠球菌和屎肠球菌的鉴定要点有哪些？