四、无菌用品的监测

（一）目的要求

掌握无菌用品的监测方法及结果评价。

（二）器材与试剂

（1）恒温培养箱、酒精灯。

（2）无菌吸管、无菌试管、无菌棉签、中和剂、洗脱液、需-厌氧培养管、真菌培养管等。

（三）无菌用品的监测

1.方法

（1）阳性对照管菌液制备。

①在实验前一天取金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003的普通琼脂斜面新鲜培养物1接种环至需-厌氧培养基内，30～35℃培养16～18 h后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10～100 CFU/mL。

②取生孢梭菌CMCC（B）64941的需氧菌、厌氧菌培养基新鲜培养物1接种环，接种于相同培养基内，30～35℃培养18～24 h后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10～100 CFU/mL。

③取白色念珠菌CMCC（F）98001真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物1接种环，接种于相同培养基内，20～25℃培养24 h后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至10～100 CFU/mL。

（2）采样方法：

①取缝合针、针头、刀片等小件医疗器械5件，直接浸入6管需-厌氧培养管（其中1管作阳性对照）与4管真菌培养管。培养基用量为15毫升/管。

②取5副注射器，在5 mL洗脱液中反复抽吸5次，洗下管内细菌，混合后接种需-厌氧菌培养管（共6管，其中1管作阳性对照）与真菌培养管（共4管）。

接种量：1 mL注射器为0.5 mL，2 mL注射器为1 mL，5～10 mL注射器为2 mL，20～50 mL注射器为5 mL。

培养基用量：接种量在2 mL以下时培养基用量为15毫升/管，接种量为5 mL时培养基用量为40毫升/管。

③手术钳、镊子等大件医疗器械取2件，用蘸有无菌洗脱液的棉拭子反复涂抹采样，将棉拭子投入5 mL无菌洗脱液中，将采样液混匀，接种于需-厌氧培养管（共6管，其中1管作阳性对照）与真菌培养基（共4管）。接种量为1毫升/管，培养基用量为15毫升/管。

（3）培养：在待检样本的需-厌氧培养管中，接种预先准备的金黄色葡萄球菌阳性对照管液1 mL（1∶1000稀释），将需-厌氧培养管以及阳性与阴性对照管均于30～35℃培养5天，真菌培养管与阴性对照管于20～25℃培养7天，培养期间逐日检查是否有菌生长。如培养基出现混浊或沉淀，经培养后不能从外观上判断时，可取培养液转种入另一支相同的培养基中或斜面培养基上，培养48～72 h后，观察是否再现混浊或在斜面上有无菌落生长，并在转种的同时，取培养液少量，涂片染色，用显微镜观察是否有菌生长。

2.结果判断　阳性对照在24 h内应有菌生长，阴性对照在培养期间应无菌生长，如需-厌氧菌及真菌培养管内均为澄清或虽混浊但经证明并非有菌生长，判为灭菌合格；如需-厌氧菌及真菌培养管中任何1管为混浊并证实有菌生长，应重新取样，分别同法复试2次，除阳性对照外，其他各管均不得有菌生长，否则判为灭菌不合格。

3.注意事项　洗脱液与培养基无菌实验：无菌实验前3天，于需-厌氧培养基与真菌培养基内各接种1 mL洗脱液，分别置于30～35℃与20～25℃培养72 h，应无菌生长。

送检时间不得超过6 h，若样本保存于0～4℃，则不得超过24 h。

被采样本表面积＜100 cm2，取全部表面；被采样本表面积≥100 cm2，取100 cm2。

若消毒试剂为化学消毒剂，采样液中应加入相应中和剂。

（陶元勇）