二、手、空气、物体表面等消毒效果的监测

（一）目的要求

（1）掌握手消毒效果的监测方法及结果评价。

（2）掌握空气消毒效果的监测方法及结果评价。

（3）掌握物体表面消毒效果的监测方法及结果评价。

（二）器材与试剂

（1）恒温培养箱、酒精灯。

（2）无菌吸管、无菌试管、无菌棉签、中和剂、洗脱液、标准灭菌规格板、营养琼脂培养基等。

（三）手卫生的监测

1.方法

1）采样方法　被检人员洗手消毒后，五指并拢。将棉拭子浸泡在含有相应中和剂的无菌洗脱液中。用棉拭子从双手指屈面从指跟到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约30 cm2），并随之转动采样棉拭子。剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入10 mL含有相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。

2）检测方法　将采样管在混匀器上振荡20 s或用力振打80次。

用无菌吸管吸取1 mL待检样本接种于无菌平皿。每一样本接种于2个平皿，再加入已经溶化的45～48℃的营养琼脂15～18 mL，边倾注边摇匀，待琼脂凝固。将平皿置于（36±1）℃恒温培养箱培养48 h，计数菌落数。

3）结果计算方法

2.结果判断

Ⅰ类和Ⅱ类区域医务人员的手卫生要求为细菌总数≤5 CFU/cm2。Ⅰ类和Ⅱ类区域包括层流洁净手术室、层流洁净病房、普通手术室、产房、普通保护性隔离室、供应室洁净区、烧伤病房、重症监护病房等。

Ⅲ类区域医务人员的手卫生要求为细菌总数≤10 CFU/cm2。Ⅲ类区域包括儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室及各类普通病房和房间等。

Ⅳ类区域医务人员的手卫生要求为细菌总数≤15 CFU/cm2。Ⅳ类区域包括感染性疾病科、传染病科及病房。

各类区域医务人员的手均不得检出致病微生物。

（四）空气效果的监测

1.方法

1）布点方法　洁净手术部（室）及其他洁净用房可选择沉降法或浮游菌法，参照《医院洁净手术部建筑技术规范》（GB50333—2013）要求进行监测。浮游菌法可选择六级撞击式空气采样器或其他经验证的空气采样器。监测时将采样器置于室内中央0.8～1.5 m高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30 min。房内面积＞10 m2者，每增加10 m2增设一个采样点。

未采用洁净技术净化空气的房间采用沉降法：室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线3点，内、外布点部位距离墙壁1 m处；室内面积＞30 m2，设四角及中央5点，四角的布点部位距离墙壁1 m处。

2）采样方法　将普通营养琼脂平板（直径为9 cm）放在室内各采样点，采样高度为距离地面0.8～1.5 m；采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露规定时间后盖上平皿盖及时送检。

3）检测方法　将送检平皿置于（36±1）℃恒温培养箱培养48 h计数菌落数。若怀疑与医院感染暴发有关时，进行目标微生物的检测。

4）结果计算方法

沉降法按平均每皿的菌落数报告，单位为CFU/（皿·暴露时间）。

2.结果判断　洁净手术部（室）和其他洁净场所，空气中的细菌菌落总数要求应遵循《医院洁净手术部建筑技术规范》（GB50333—2013）。

非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区空气中的细菌菌落总数≤4 CFU/（15 min·直径9 cm平皿）。

儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房空气中的细菌菌落总数≤4 CFU/（5 min·直径9 cm平皿）。

3.注意事项

（1）采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10 min后进行采样。

（2）操作过程中手不可触及培养皿内壁。

（3）平皿应新鲜透亮，当天领取使用。

（4）如为空气采样机采样，按照操作说明进行。

（五）物体表面消毒效果的监测

1.方法

1）采样方法　用5 cm×5 cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面。用浸有无菌0.03%mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）或生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板面积，被采表面＜100 cm2，取全部表面；被采表面≥100 cm2，取100 cm2。剪去手接触部位后，将棉拭子放入10 mL无菌检验用洗脱液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体表面采样。采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。

2）检测方法　充分振荡采样管后，取不同稀释倍数的洗脱液1 mL接种平皿，向冷却至40～45℃的溶化营养琼脂培养基每皿倾注15～20 mL，（36±1）℃恒温箱培养48 h计数菌落。怀疑与医院感染暴发有关时，进行目标微生物的检测。

3）结果计算方法

小型物体表面的结果计算，用CFU/件表示。

2.结果判断　洁净手术部（室）、其他洁净场所、非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等，物体表面细菌菌落总数≤5 CFU/cm2。

儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房等，物体表面细菌菌落总数≤10 CFU/cm2。