四、微量棋盘稀释法联合药敏实验

（一）目的要求

（1）熟悉微量棋盘稀释法联合药敏实验的原理、操作方法和结果判定。

（2）了解微量棋盘稀释法联合药敏实验FIC指数计算和判断。

（二）器材与试剂

同微量液体稀释法。

（三）原理

棋盘稀释法是目前临床实验室常用的定量方法，利用肉汤稀释法原理，计算部分抑菌浓度（fractional inhibitory concentration，FIC）指数，根据FIC指数评估测定细菌对联合药物的敏感度。

（四）步骤与方法

1.方法　首先分别测定拟联合的抗菌药物A和B对待检菌的MIC，根据抗菌药物A和B的MIC确定药物联合测定的稀释度，一般选择6～8个稀释度；每种抗菌药物的最高浓度为其MIC的2倍，采用棋盘稀释法，假设A菌的MIC=32 μg/mL，B菌的MIC=8 μg/mL，其棋盘稀释法操作示意，见表3-2。

具体操作时，微量棋盘稀释法同微量液体稀释法，琼脂棋盘稀释法同琼脂稀释法。

表3-2　棋盘稀释法示意表

2.结果判定　根据生长对照孔的细菌生长情况进行比较判断。无肉眼可见生长的最低药物浓度为测定药物对测试菌的MIC。根据以下公式计算FIC指数：

FIC指数=A药联合时的MIC/A药单测MIC+B药联合时的MIC/B药单测MIC

判断标准：FIC指数＜0.5为协同作用；0.5～1为相加作用；1～2为无关作用；＞2为拮抗作用。

（五）思考题

（1）试述联合药物敏感实验的意义。

（2）微量棋盘稀释法联合药敏实验的四种结果包括什么？与FIC指数的关系如何？

（李秀真）