三、E实验法

E实验法（epsilometer test，E-test）是一种结合稀释法和扩散法原理对抗菌药物直接定量的药敏实验技术。

（一）目的要求

（1）掌握E-test的原理、操作方法、结果判定。

（2）熟悉E-test的质控。

（二）器材与试剂

1.菌种　金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌或大肠埃希菌。

2.试剂　无菌生理盐水、E-test试条、M-H琼脂等。

3.器材　无菌棉拭子、接种环、试条置放器或镊子、比浊仪等。

（三）原理

E-test试条是一条5 mm×50 mm无孔试剂载体，一面固定有一系列预先制备的浓度呈连续指数增长的抗菌药物，另一面用数字标出所含该药物的浓度（μg/mL），抗菌药物的梯度可覆盖有20个MIC对倍稀释浓度的宽度范围，其斜率和浓度范围对判别有临床意义的MIC范围和折点具有较好的关联。E-test结合了稀释法和扩散法的原理和特点，操作简便同扩散法，但可以像稀释法一样直接定量测出抗菌药物对测试菌的MIC，结果准确，重复性好。

（四）步骤与方法

1.方法　菌液制备及接种均同纸片扩散法，特别强调在涂布细菌后要等琼脂表面干燥后才可用E-test加样枪或镊子贴加试条，试条全长应与琼脂平板紧密接触，试条MIC刻度面朝上，浓度最大处靠平板边缘。90 mm M-H琼脂平板可放E-test试条1～2条，140 mm的M-H琼脂平板可放6条。孵育温度及时间同纸片扩散法。质控同稀释法。

2.结果判定　经16～24 h孵育后围绕试条可形成一个椭圆形的抑菌圈，抑菌圈边缘和试条的横向相交处的刻度读数即是该抗菌药物对测试菌的MIC。MIC单位为μg/mL，根据MIC值，参照CLSI标准，报告相应的敏感或耐药。

（五）注意事项

（1）贴E-test试条时，应刻度面朝上，不得贴反，一旦药面接触琼脂后绝对不能再移动，因为抗菌药物会在数秒内渗入琼脂中。

（2）贴试条时应注意下面是否压有气泡，气泡会影响药物的均匀扩散，影响实验结果，可用挤压的方法赶出气泡。

（3）如果抑菌圈位于上、下刻度之间或两侧相交处不一致时，应读取较高一侧所示的读数。

（4）出现双抑菌圈时，应读生长被完全抑制的部分与E-test试条相交处的读数。

（六）思考题

E-test的原理是什么？哪些因素会影响实验结果？