二、不染色检查法

（一）临床意义

不染色检查法就是直接用显微镜观察活体细菌的形态、大小及运动方式的一种方法，主要用于观察细菌的动力，常用的方法有悬滴法和压滴法等。

（二）目的要求

（1）掌握细菌不染色标本片的制备及细菌动力的显微镜观察方法。

（2）了解不染色检查的临床意义。

（三）器材与试剂

1.菌种　普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌。

2.试剂　生理盐水、凡士林等。

3.其他　普通光学显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、镊子、接种环、酒精灯、蜡笔、擦镜纸、吸水纸等。

（四）步骤与方法

1）原理　不染色标本一般可用于观察细菌形态、动力及运动情况。细菌未染色时为无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。有鞭毛的细菌运动活泼，无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。梅毒苍白密螺旋体、钩端螺旋体、弯曲杆菌等的活菌各有特征鲜明的形态和运动方式，具有诊断意义。常用的方法有悬滴法、压滴法和毛细管法等。

2）操作步骤

（1）悬滴法：在盖玻片中央滴加菌液，取特制凹玻片，于凹窝四周涂抹少许凡士林，并将凹窝对准盖玻片菌液处扣下，让凡士林贴封四周后迅速翻转玻片，使盖玻片朝上，菌液悬于盖玻片下。静置片刻后，置于显微镜载物台中央，将集光器下降缩小光圈，用低倍镜找到悬滴的边缘后，再换高倍镜观察。

（2）压滴法：在载玻片上滴加菌液后，用镊子夹好盖玻片，使之一边接触菌液，然后缓缓放下，以不产生气泡为佳。先用低倍镜找好位置，再用高倍镜或油镜观察。

3）结果　有鞭毛的细菌动力阳性，运动活泼，镜下可见细菌从一端快速移动到另一端；无鞭毛细菌则动力阴性，呈不规则布朗运动。

（五）注意事项

（1）不染色检查法观察细菌动力时，应选用新鲜的幼龄细菌培养物，观察时应在20℃以上的室温中进行。

（2）应注意区别细菌发生的真正运动和布朗运动，有鞭毛的细菌发生的定向位移为真正运动，无鞭毛的细菌在液体中受水分子的撞击而呈现的颤动则为布朗运动（即分子运动）。

（3）不染色标本的观察注意调节显微镜的光线，稍暗的视野有利于观察菌体运动。

（六）思考题

细菌的动力除了使用不染色检查法外，还可以通过什么方法来检查？

（杨晶艳）