二、临床微生物学实验室的生物安全

临床微生物学实验室生物安全管理的根本目标是减少或避免实验室生物因子危害事件的发生，保障人员的健康和生命安全，保护环境，维护社会安全与稳定。构成临床微生物学实验室生物安全的三要素包括工作人员、硬件和软件，其中工作人员是核心要素。

（一）实验室设计和设施设备管理

（1）新建实验室选址应远离公共场所，实验室可共用建筑物，与建筑物其他部分可相通。

（2）实验室应设可自动关闭的带锁的门，可开启的窗户应安装纱窗。

（3）实验室墙壁、天花板和地面应光滑、易清洁、防渗漏并耐化学品和消毒剂的腐蚀，地面应防滑。

（4）实验室台面应防水、耐热、耐酸碱、耐有机溶剂及消毒药品，并且易于清洁。

（5）实验室应配备洗手池，并靠近出口处。

（6）实验室中的设备（如实验台、生物安全柜等）应固定，设备间应保持一定空间，以便于清洁。

（7）实验室应配备各种消毒设施，如高压蒸汽灭菌装置、化学消毒装置等。

（8）生物安全柜要放在远离门、开放的窗户、走动比较频繁的实验区域以及其他具有潜在破坏性的设备处，以维持生物安全柜的气流参数。

（9）实验室应配备眼睛冲洗装置。

（二）人员防护

（1）进入实验室应穿长及膝盖的实验服或隔离衣，严禁穿拖鞋或凉鞋等露脚趾的鞋。

（2）实验区域禁止佩戴戒指、手镯、腕表等饰品，长发必须扎束于脑后。

（3）限制或禁止非本实验室工作人员进入，禁止在实验区域会客。

（4）在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套，手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。

（5）在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须按正规流程洗手。

（6）为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害，必须佩戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。

（7）严禁穿着实验室防护服离开实验室，如去餐厅、咖啡厅、办公室、图书馆、员工休息室和卫生间。

（8）在实验室内穿过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。

（9）离开实验室前，脱下实验服，反折放入专用容器内，消毒液泡手5～10 min，然后用自来水冲洗干净。

（三）基本操作规范

临床实验室的防护级别为BSL-2，实验操作对象主要为临床样本（患者的血液、体液、排泄物等），还包括各种菌（毒）种、细菌鉴定的培养物，以及气溶胶等，均应视为感染性物质。对感染性物质要严格管理，避免发生实验室感染或引起传染病的传播，如感染性物质的接收、保存、领用和销毁，以及有害气溶胶的防护管理等，要严格按相关标准操作程序进行。

（1）存在传染源时，应在实验室入口处贴上生物危险标志，同时注明致病因子名称、研究室负责人姓名及电话号码，同时在实验室内部显著位置贴上有关的生物危险信息。

（2）实验室应保持清洁整齐，严禁摆放和实验无关的物品。

（3）严禁用口吸移液管，应使用专用装置移液器吸取液体。

（4）所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。使用接种环刮取平板上的菌落、吸取带菌液体、制作细菌涂片、打开培养物等时，应尽量减少气溶胶或泡沫的生成；可能产生感染性气溶胶或飞溅物的实验过程，包括研磨、混合、匀浆、剧烈振荡或混匀、超声破碎、开启装有感染性物质的容器等，应在生物安全柜中进行。

（5）无菌操作时禁止开电风扇。

（6）感染性材料离心应使用安全的离心杯或密封的离心机转子。

（7）制定锐利器安全操作使用程序，应限制使用皮下注射针头和注射器，除进行肠道外注射或抽取实验动物体液外，皮下注射针头和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途。

（8）感染性材料溢出或发生其他可能导致人员暴露于感染性物质的事故时，必须制订关于如何处理书面操作程序，并予以遵守执行。发生事故必须向实验室主管报告，实验室应保存事件或事故处理的书面报告。

（9）所有受到污染的材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用之前，必须使用可行的方法进行消毒灭菌，用过的吸管、滴管、试管、玻片等污染器材应放在指定地方或含有消毒液的容器内。

（10）在进行感染性物质包装和运输时必须遵循国家和（或）国际的相关规定。

（四）临床实验室区域消毒

临床实验室一般分清洁区、半污染区、污染区。目前实验室一般使用含氯消毒剂进行消毒。实验室不同区域的消毒需要相应的有效氯浓度。

1.清洁区　包括办公室、盥洗室、休息室、培养基室等。每天开窗通风换气，擦拭桌面、地面。每周用500 mg/L有效氯消毒液擦拭。

2.半污染区　包括缓冲间、更衣室及卫生通道等区域。这些区域可能存在致病菌污染。空气消毒常采用紫外灯照射消毒、空气净化器消毒；门窗、桌面等物体表面用500 mg/L有效氯消毒液擦拭；工作用鞋用500 mg/L有效氯消毒液擦拭，消毒30 min；工作衣、隔离衣通常由医院洗衣房统一消毒处理。

3.污染区　包括实验室样本收集区、处理区、培养区、鉴定药敏区和废弃物处理区等。空气消毒常采用紫外灯照射消毒、空气净化器消毒。手消毒通常用250 mg/L有效氯消毒液或专用洗手液消毒。门窗、桌面、贵重仪器设备等物体表面消毒需用500 mg/L有效氯消毒液擦拭。被样本污染的物体表面消毒用1000 mg/L有效氯消毒液消毒30～60 min。被病毒和结核杆菌污染的表面要用2000 mg/L有效氯消毒液消毒30 min。

（五）临床实验室常用消毒与灭菌方法

临床实验室采用的消毒灭菌方法有物理方法和化学方法等，其中高压蒸汽灭菌法、化学消毒法、焚烧法最常用。

1.物理方法　包括热力灭菌法、辐射杀菌法、超声波杀菌法、过滤除菌法等。其中热力灭菌法最为常用。热力灭菌法分为干热灭菌法和湿热灭菌法两类。

（1）干热灭菌法：其杀菌机制是高温能使菌体蛋白质分子变性及细胞质浓缩，使新陈代谢发生障碍而死亡。干热灭菌法可杀死一切微生物，包括芽孢，还可以破坏热原质，主要包括焚烧法、烧灼法、干烤法、红外线法等。在处理经过或事先未经清除污染的动物尸体以及解剖组织或其他实验室废弃物时，焚烧法是一种有效的方法，但应符合有关规定，在指定地点进行，一般交由废弃物处理部门完成。

（2）湿热灭菌法：湿热灭菌法是最常用的灭菌法。其杀菌机制是促使菌体蛋白质变性、凝固，促使细菌核酸降解，损伤细菌胞膜。特点是传热快、穿透力强，蒸汽具有潜热，灭菌效果比干热灭菌法好。湿热灭菌法主要包括高压蒸汽灭菌法、间歇蒸汽灭菌法、流通蒸汽消毒法、煮沸法、巴氏消毒法等。高压蒸汽灭菌法是对实验材料进行灭菌的最有效和最可靠的方法。对于大多数实验材料灭菌，可采用一定的温度和时间组合以确保高压蒸汽灭菌器的灭菌效果：134℃，3 min；126℃，10 min；121℃，15 min；115℃，25 min。高压蒸汽灭菌器的放气阀上应有过滤膜，其安装位置不应影响生物安全柜等安全隔离装置的气流。

2.化学方法　许多化学药物可对病原微生物的化学组成、物理结构和生理活动产生影响，从而发挥灭菌、消毒和防腐作用。凡不适于物理消毒灭菌且耐潮湿的物品，如锐利的金属器械（刀、针等）、内镜、塑料导管、光学仪器及皮肤、黏膜、患者分泌物、排泄物、实验室空气等均可采用此法。化学消毒主要方法有浸泡法、擦拭法、熏蒸法、喷雾法、环氧乙烷气体密闭消毒法。

化学消毒剂按其作用效力分为高、中和低三类。

高效消毒剂：可杀灭细菌（繁殖体及其芽孢）以及病毒、真菌在内的一切微生物，可作为灭菌剂，包括甲醛、戊二醛、过氧乙酸、环氧乙烷、过氧化氢、有机汞化合物等。

中效消毒剂：可杀细菌芽孢以外的其他各种微生物，包括乙醇、碘、酚类、含氯消毒剂等。

低效消毒剂：可杀灭结核分枝杆菌（MTB）以外的其他细菌繁殖体、真菌和亲脂类病毒，包括新洁尔灭、洗必泰等。