拓展阅读四  T-A克隆技术

        该技术主要用于将PCR产物直接克隆于载体。其原理是：Taq DNA聚合酶具有末端转移酶活性，能在PCR反应中使所合成的双链DNA的3(-端加上一个碱基A，从而使PCR产物的3(-端成为带有A碱基突出的黏端。通过改造载体，使之3(-端成为带有T碱基突出的黏端，此即T载体。

        在T4 DNA连接酶的作用下，利用T-A互补原理，即可将上述PCR产物直接克隆于T载体上。在此基础上，人们又发展了Topo T-A克隆法，其原理与上述T-A克隆类似，唯一不同的是T-A克隆中使用T4 DNA连接酶，而Topo T-A克隆则使用DNA拓扑异构酶（DNA topoisomerase）将PCR产物连接到T载体上。因为DNA拓扑异构酶连接效率很高，故整个连接反应通常只需5分钟。T-A克隆技术简化了PCR产物的克隆过程，且无需在PCR引物中设计酶切位点。

【推荐阅读】

Holton TA., Graham MW. A simple and efficient method for direct cloning of PCR products using ddT-tailed vectors. Nucleic Acids Research. 19 (5): 1156. 1991

（王丽颖）