（二）重组DNA技术相关概念

1．DNA克隆（DNA cloning）　就是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质——同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子——基因克隆／重组DNA。

基因工程（genetic engineering）：与重组DNA相关的技术。生物技术工程：基因工程、蛋白质工程、酶工程、细胞工程等。

2．工具酶

限制性内切核酸酶（restriction endonuclease）：识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。

有3类：常用的限制性内切核酸酶为Ⅱ类酶，如EcoRⅠ、BamHⅠ。

大部分Ⅱ类酶识别DNA位点的核苷酸序列呈二元旋转对称——回文结构（palindrome）。

特点：

·限制性内切核酸酶在细菌内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制－修饰体系，限制外源DNA、保护自身DNA。

·限制性内切核酸酶识别序列长短不一，为4、6或8个。

·切割位点不同，产生的末端不同。

其他工具酶有：DNA连接酶、DNA－polⅠ、Klenow片段、反转录酶、多聚核苷酸激酶、末端转移酶、碱性磷酸酶。

3．目的基因（target DNA）　有2种类型：cDNA、基因组DNA。

4．基因载体（vector）或称克隆载体　为携带目的基因、实现外源DNA的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子。

表达载体：为使插入的外源DNA序列可转录、翻译成多肽链而特意设计的克隆载体。

可充当载体的DNA分子有：质粒DNA、噬菌体DNA、病毒DNA，经适当改造后仍具有自我复制能力，或兼有表达外源基因的能力。

质粒（plasmid）：存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子，小的2～3kb，大的数十万碱基对（数百kb）。

·质粒本身是含有复制功能的遗传结构，能在宿主细胞独立自主地进行复制，并在细胞分裂时保持恒定地传给子代细胞。

·质粒带有某些遗传信息，会赋予宿主细胞一些遗传性状，如对青霉素或重金属的抗性等。

★★★　pBR322质粒：①含单个EcoRⅠ限制性内切核酸酶位点——可插入外源基因；②含有抗四环素的抗药基因——terr；③含有抗氨苄青霉素的抗药基因——ampr；④含有一个复制起始点（ori）及与DNA复制调节有关的序列。

λ噬菌体和M13噬菌体。

cosmid vector、酵母人工染色体载体（YAC）——可增加插入外源基因的容量。

动物病毒DNA改造的载体，如腺病毒载体、反转录病毒载体——真核基因表达或基因治疗所需。