（三）酶促反应动力学

1．底物浓度对反应速度的影响　在其他因素不变的情况下，底物浓度与反应速度作图呈矩形双曲线。

［S］较低时，v∝［S］——一级反应；［S］增高时，v也增大；［S］增加，v不变时——零级反应

前提：①测定的反应速度为初速度，即反应开始，产物的生成量极少，逆反应可不考虑；

②过大于［E］，［S］的变化在测定初速度的过程中可急略不计。

Km与Vm的意义：

Km值为酶促反应速度为最大速度一半时的底物浓度。

Km值可用来表示酶对底物的亲和力，Km值愈小，酶与底物的亲和力愈大。

Km值是酶的特征性常数之一，与酶的结构有关，与酶的浓度无关。

Km值与酶所催化的底物和反应环境（如温度、pH值、离子强度）有关。

Vm是酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度成正比。

Km值和Vm值的测定：双倒数作图法（林－贝氏作图法）：以1／V对1／［S］作图，纵轴上的截距为1／Vm，横轴上的截距为－1／Km

Hanes作图法：以［S］／v对［S］作图，横轴上的截距为－Km，直线的斜率为1／Vm。

2．酶浓度对反应速度的影响　［S］＞［E］时，v正比于［E］。

3．温度对反应速度的影响

升高温度可加快反应速度，也可增加酶的变性；温度降低，酶的活性下降，但不变性。

最适温度：酶促反应速度最快时的环境温度，它不是酶的特征常数，与反应进行的时间有关。

4．pH值对反应速度的影响

影响酶活性中心的基团解离及底物的解离状态，影响底物与酶的亲和力。

最适pH值：酶促反应速度最快时的环境pH值，它不是酶的特征常数，受底物浓度、缓冲液的种类与浓度、酶的纯度等因素的影响。

5．激活剂对反应速度的影响　酶的激活剂：使酶由无活性变为有活性或使酶活性增加的物质，如K＋、Mg2＋、Zn2＋。

必需激活剂：缺之，酶则无活性。如Mg2＋是己糖激酶的必需激活剂。

非必需激活剂：不存在时，酶仍有活性。如Cl－是唾液淀粉酶的非必需激活剂。

6．抑制剂对反应速度的影响　酶的抑制剂：凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质。可分2类：

不可逆性抑制作用。抑制剂以共价键与酶的活性中心上必需基团相结合，使酶失活，且不能用透析、超滤等物理方法去除。

有机磷与羟基酶结合（如敌敌畏、1059等农药），解磷定（PAM）解毒。

重金属离子（Hg2＋、Ag＋）及砷类化合物与巯基酶结合，如路易士气。二巯基丙醇（BAL）解毒。

可逆性抑制作用。抑制剂以非共价键与酶和（或）酶－底物复合物可逆性结合，使酶活性降低或消失，用透析、超滤等物理方法可将抑制剂去除。

竞争性抑制作用：抑制剂与底物结构相似，与底物竞争酶的活性中心；抑制强度与［I］／［S］有关；Vm不变，表观Km值增大。

磺胺类药物与对氨基苯甲酸相似，竞争性抑制二氢叶酸合成酶，影响细菌的生长繁殖。

非竞争性抑制作用：抑制剂与酶的活性中心外的必需基团结合，不影响酶与底物的结合，酶和底物的结合也不影响酶与抑制剂的结合。抑制强弱只与抑制剂浓度有关，与底物浓度无关；Vm降低，表观Km值不变。

反竞争性抑制作用：仅与酶和底物形成的中间产物（ES）结合，使中间产物的量下降；Vm降低，表观Km值减少。