二、重组DNA技术
可以概括成分、切、接、转、筛、表。
分:分离出来要研究的目的基因,常用的手段有:制备基因组DNA文库,制备cDNA文库,PCR,RT-PCR,化学合成等。
切:将载体在多克隆位点处切开(使用限制性内切酶)
接:将分离的目的基因与载体连接(使用连接酶)
转:将含有目的基因的载体转到细胞内(分为转化与感染,如果质粒独立于基因组DNA之外独自表达,称转化;如果基因整合到细胞的基因组DNA内表达,就是感染)
筛:转化或转染的成功率不可能达到100%,要筛选出成功转化或感觉的细胞,常用的有抗生素筛选,如上图的质粒具有卡那霉素抗性特征
表:筛选出成功导入目的基因的细胞后,要让目的基因在宿主细胞内表达。常用的表达体系有大肠杆菌、酵母、CHO细胞等。