二、免疫学诊断（了解）

免疫学诊断是指应用免疫学理论检测抗原、抗体、免疫细胞及细胞因子等的实验技术。免疫学检测技术已广泛应用于医学和生物学领域的研究，在有关疾病（如传染病、免疫缺陷、自身免疫病、肿瘤、移植排斥反应、超敏反应等）的诊断、发病机制的研究、病情监测与疗效评价等方面具有重要的意义。

（一）抗原或抗体检测

抗原抗体检测技术的基本原理是抗原和抗体在体外特异性结合后可出现肉眼可见或借助仪器可检测出的反应现象。因试验用的抗体来自血清，故检测抗原或抗体的反应又称为血清学反应或血清学试验。试验时既可用已知抗体检测标本中有无相应抗原，也可用已知抗原检测标本中有无相应抗体。

1、抗原抗体反应的特点

特异性；可逆性 ；比例适当 ；阶段性。

2、抗原抗体反应的类型

（1）凝集反应  颗粒性抗原（细菌、细胞等）与相应抗体结合，在电解质存在下，形成肉眼可见的凝集物，称凝集反应。

 ①直接凝集反应：指颗粒性抗原直接与相应抗体结合出现凝集现象，包括玻片法和试管法。玻片法为定性试验，简便快速，多采用已知抗体检测未知抗原，常用于细菌鉴定和ABO血型鉴定。试管法为半定量试验，即将被检血清在试管中进行倍比稀释后再加入等量抗原，在适当温度下经一定时间反应后观察结果，根据出现明显凝集现象的血清最高稀释倍数判断抗体效价。临床诊断伤寒或副伤寒的肥达反应属试管法。

②间接凝集反应：可溶性抗原（蛋白质、多糖等）吸附于载体颗粒表面，与相应抗体结合而出现的凝集现象称间接凝集反应（图1）。常用的载体颗粒有红细胞、乳胶、活性炭等。

若将抗体吸附载体颗粒，用以检测可溶性抗原，则称为反相间接凝集反应。如果先将可溶性抗原与相应抗体混合，两者反应后再加入致敏载体颗粒，则不出现凝集现象，此反应称间接凝集抑制反应。

间接凝集反应具有简便、快速、灵敏度高等优点，因此在临床上得到广泛应用，例如妊娠胶乳试验以及类风湿因子（属间接凝集反应）、乙肝病毒表面抗原（反相间接凝集反应）、梅毒反应素的检测等，均可采用间接凝集试验。

2．沉淀反应  可溶性抗原与相应抗体结合后，在一定条件下出现肉眼可见的沉淀物，称沉淀反应。参与沉淀反应的抗原称沉淀原，抗体称沉淀素。

沉淀反应的方法有：(1)琼脂扩散试验：①单向琼脂扩散试验；②双向琼脂扩散试验；③火箭电泳；④对流免疫电泳。(2)免疫比浊技术。

3.免疫标记技术  免疫标记技术是采用酶、荧光素、放射性核素等标记物标记抗原或抗体所进行的抗原抗体反应。免疫标记技术既可对样品作定性、定量检测，也可进行定位分析，且大大提高了方法的灵敏度，是目前应用最广泛的免疫学检测技术。

(1)免疫酶测定法（IEA）：本法是抗原抗体反应的特异性与酶对底物的高效催化活性相结合的免疫检测技术。酶标记的抗原或抗体与待检标本中的相应成分特异性结合，根据酶作用底物后的颜色变化，采用肉眼或酶标检测仪分析、判断结果。常用方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）。酶联免疫吸附试验的原理见图2。

(2)免疫荧光技术：该技术是用荧光素标记抗体与标本中的抗原结合后用洗涤液洗涤，然后在荧光显微镜下观察。常用方法有直接法和间接法。

(3)放射免疫测定法（RIA）：该法是用放射性核素作为标记物标记抗原或抗体所进行的抗原抗体反应，尽管放射免疫技术需特殊仪器设备且有一定的放射性危害，但由于其具有高度的灵敏度和自动化检测等特点，因此在实验研究和临床检测中仍被广泛应用。

(4)免疫印迹法：它将凝胶电泳与固相免疫结合，把电泳分区的蛋白质转移至固相载体，再用酶免疫放射免疫等技术测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测多种病毒的抗体或抗原。如应用该法检测血清HIV抗体为诊断HIV感染的方法之一。

(5)免疫PCR ：是将免疫反应的特异性与聚合酶链反应的敏感性相结合的一种免疫学检测技术。其原理是用一段已知的DNA分子作为标记物，结合一抗或二抗后，去检测相应抗原或抗体，再用PCR法扩增此段DNA分子，扩增产物用琼脂糖电泳定性，根据该DNA分子的存在与否，确定检测结果。该法敏感性高于放射免疫，可达fg/ml水平，特别适合体液中含量甚微的抗原或抗体的检测。

（二）免疫细胞及其功能检测

１、T细胞及其亚群检测  

目前多采用荧光免疫法,通过检测T细胞表面的CD抗原来了解外周血T细胞及其亚群的百分率。

2、淋巴细胞转化试验  

T细胞在体外能被非特异性丝裂原（植物血凝素等）激活，从而转化为体积较大的淋巴母细胞，显微镜下可观察其形态并计算淋巴细胞转化率。由于转化过程中其DNA、RNA和蛋白质的合成增加，因此也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法，通过测定细胞内放射性核素相对含量来计算淋巴细胞转化率。周发生。