任务2 小鼠实验的基本操作

一、实训目的

学会小鼠实验的基本操作方法，如小鼠的挑选、捉持、分组编号、给药、采血和处死等。

二、实训动物

小鼠

三、实训器材

灌胃针头、1ml注射器、实验托盘

四、实训内容和方法

1. 小鼠的挑选 一般挑选毛色发亮、活动自如、无发育异常，体重为20±2g，雌雄可根据不同实验要求而定。小鼠的优点是易饲养，繁殖力强，成熟期短，可用于多种途径（灌胃、皮下注射、腹腔注射、尾静脉注射等）给药，适用于多种药理实验。

2. 小鼠捉持方法 小鼠性情较温顺，一般不会咬人，比较容易抓取固定。通常用右手提起小鼠尾巴将其放在鼠笼盖或其他粗糙表面上，在小鼠向前挣扎爬行时，用左手拇指和示指捏住其双耳及颈部皮肤，将小鼠置于左手掌心，环指和小指夹其背部皮肤和尾部，即可将小鼠完全固定。在一些特殊的实验中，如进行尾静脉注射时，可使用特殊的固定装置进行固定，如尾静脉注射架或专用小鼠固定筒。如要进行手术或心脏采血应先行麻醉再操作，如进行解剖实验则必须先行无痛处死后再进行。

3. 小鼠的编号和分组

（1）小鼠的编号：小鼠常需要标记以示区别。编号的方法很多，常用针刺法，即用7号或8号针头蘸取少量碳素墨水，在耳部、前后肢以及尾部等处刺入皮下，在受刺部位留有一黑色标记。

（2）小鼠的分组：进行动物实训时，经常需要将选择好的实训动物按研究的需要分成若干组。动物分组应按随机分配的原则，使每只动物都有同等机会被分配到各个实验组与对照组中去，以避免各组之间的差别，影响实训结果，特别是进行准确的统计检验，必须在随机分组的基础上进行。

4. 小鼠的给药方法 在小鼠实训中，为了观察药物对机体的作用，常需要将药物注入小鼠体内。给药的途径和方法多种多样，可根据实训目的和药物剂型、剂量等情况来确定。

（1）注射给药法：

1）皮下注射：注射时用左手拇指及示指轻轻捏起皮肤，右手持注射器将针头刺入，固定后即可进行注射。一般小鼠在背部或前肢腋下，拔针时，轻按针孔片刻，防药液逸出。

2）皮内注射：皮内注射的方法是将小鼠注射部位的毛剪去，消毒后，用皮试针头紧贴皮肤皮层刺入皮内，然后使针头向上挑起并再稍刺入，即可注射药液。注射后可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。

3）肌肉注射：肌肉注射时针头要垂直快速刺入肌肉，如无回血现象即可注射。给小鼠作肌肉注射时，选大腿外侧肌肉进行注射。

4）腹腔注射：先将动物固定，腹部用酒精棉球擦拭消毒，然后在左或右侧腹部将针头刺入皮下，沿皮下向前推进约0.5cm，再使针头与皮肤呈45°角方向穿过腹肌刺入腹腔，此时有落空感，回抽无肠液、尿液后，缓缓推入药液。此法大小鼠用得较多。

5）尾静脉注射：小鼠的尾静脉共有3 根，左右两侧和背侧各1 根，两侧尾静脉比较容易固定，故常被采用。操作时，先将动物固定在暴露尾部的固定器内（可用烧杯、铁丝罩或粗试管等物代替），用75％酒精棉球反复擦拭使血管扩张，并可使表皮角质软化，以左手拇指和示指捏住鼠尾两侧，使静脉充盈，注射时针头尽量采取与尾部平行的角度进针。开始注射时宜少量缓注，如无阻力，表示针头已进入静脉，这时用左手指将针和尾一起固定起来，解除对尾根部的压迫后，便可进行注射。如有白色皮丘出现，说明未穿刺入血管，应重新向尾根部方向移动针头再次穿刺。注射完毕后把尾部向注射侧弯曲以止血。如需反复注射，尽量从尾的末端开始。一次的注射量为每10g体重为0.1～0.2ml。

（2）经口给药法：小鼠经口给药常用灌胃法。灌胃法是用灌胃器将所应投给动物的药灌到动物胃内。灌胃器由注射器和特殊的灌胃针构成。小鼠的灌胃针长4～5cm，直径为1mm，灌胃针的尖端焊有一小圆金属球，金属球为中空的。焊金属球的目的是防止针头刺入气管或损伤消化道。针头金属球端弯曲成20°左右，以适应口腔、食管的生理弯曲度走向。小鼠灌胃时用左手固定鼠，右手持灌胃器，将灌胃针从鼠的口腔插入，压迫鼠的头部，使口腔与食管成一直线，将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食道，可感到轻微的阻力，此时可略改变一下灌胃针方向，以刺激引起吞咽动作，顺势将药液注入。一般灌胃针插入小鼠深度为3～4cm。常用灌胃量小鼠为0.2～1ml。

5. 小鼠的采血方法

（1）尾尖取血法：将鼠固定后，充分暴露鼠尾，浸入50℃温水中约1min，取出擦干或在尾部涂擦二甲苯，使尾部血管扩张，此时剪掉小鼠尾尖1～2mm，血液自断端流出可收集供实训用。一次可取血液0.3～0.5ml。由于取血量少，仅供血液检验等需血量较少的实训项目。

注意事项：①为收集较多血液，可在剪尾尖前用硫喷妥钠（50mg/kg）将动物麻醉，减少剪尾疼痛引起的外周血管收缩影响血液流出。②尾尖不宜过长，否则也不出血。③鼠血易凝，流出速度又相对慢，为避免凝血，采血前应在取血器皿中放适量抗凝剂。

（2）后眼眶静脉丛取血：操作者左手捏住鼠颈背部皮肤，置实验台上，示指轻按颈部，使眼球突出，引起眼球后静脉压增加。右手持特制玻璃吸管或连有注射器的粗钝针头，沿内眦向眶后壁刺入4～5mm可达球后静脉丛，不时轻轻转动，由于压力差血液自动流入吸管或注射器。待达所需血量后，抽出吸管或针头，用干棉球轻轻内眦止血。此法简便易操作并可反复取血。

（3）眼球摘除取血：操作者左手捏住鼠颈背部皮肤，置实验台上，示指轻按颈部，使眼球突出，引起眼球后静脉压增加。右手持眼科弯镊子，夹住眼球，轻轻旋转，使劲将眼球拉出。此法简便易操作，常用于处死前取血。一次可取血液2ml。

6. 小鼠的处死方法

（1）颈椎脱臼处死法：操作者左手将小鼠的头固定在实验台上，右手抓住尾巴用力稍向上或平行后拉，使其颈椎脱臼而迅速死亡。此法简便易操作，为常用处死手段。

（2）断头处死法：左手将小鼠固定，右手持普通剪刀用力将动物头剪下，该动物死亡。

想一想

总结药理实训中常用的小鼠采血和处死的方法。