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艾滋病性病防治指南
1.4.4.2.3 三、生殖道沙眼衣原体感染检测
三、生殖道沙眼衣原体感染检测

生殖道沙眼衣原体感染的实验室检测包括细胞培养、抗原检测和核酸扩增法等。

1.生殖道沙眼衣原体培养法 生殖道沙眼衣原体是专性细胞内寄生物,它只有在活细胞中方能增殖。将标本处理后接种于实验室培养的活细胞中,如标本中有生殖道沙眼衣原体,则经培养后细胞中可出现生殖道沙眼衣原体的包涵体。目前,实验室常用的细胞为McCoy细胞及HeLa229细胞。培养要获得成功,取材是关键。所取材中必须含有活细胞。因此,取材的棉拭一定要插到柱状上皮部位,旋转且放置20s,以便拭子吸附更多的细胞。细胞培养是诊断和鉴定生殖道沙眼衣原体的“金标准”方法,敏感性和特异性均高。但操作比较复杂,需一定的条件与设备,且较费时。

2.抗原检测法 抗原检测法包括快速免疫层析法、酶联免疫法和直接免疫荧光法。快速免疫层析法试验是指将生殖道沙眼衣原体单克隆抗体的带色乳胶复合物吸附于滤纸上,将滤纸夹在2块塑料板中间。若加入的标本为阳性,则标本中的抗原与结合有乳胶的单抗结合,复合物因毛细作用向前扩散移动到结果窗,可被该处含有的未标记的鼠抗衣原体单抗所捕捉,在结果窗中出现一条黑线,标本即为阳性。过剩的未结合的带色乳胶标记的鼠抗衣原体单抗可移动到质控窗,与该处的免抗鼠抗体结合,显现一条黑线。

3.核酸扩增法 聚合酶链反应(PCR)的基本原理是一种酶促合成反应。在膜板DNA、引物和脱氧核糖核苷酸的存在下,在DNA聚合酶的作用下,使DNA链扩增延伸。试验通过加热变性使DNA双螺旋的氢链断裂,解离成单链DNA,然后通过退火,突然降温使引物与其互补的模板在局部形成杂交链,然后在DNA聚合酶、脱氧核糖核苷酸三磷酸底物和镁离子存在的条件下,在聚合酶的催化下,以引物为始点,使DNA链延伸。通过数十次循环扩增,使DNA片段得到大量复制,数量可达数百万倍。由于各种微生物的DNA千差万别,使试验具有高度特异性;由于试验中DNA片段能成对数地扩增,使方法具有高度敏感性;加之现代分子生物学技术迅速发展,已有了诸如测序仪、合成仪等仪器,使试验相对简易化。但开展PCR应具有一定的主客观条件。试验需有精密的温度控制仪和准确的微量移液管等基本设备,技术操作需有严格的防污染措施,严防极微量的微生物DNA污染试剂和实验用品,试验者应具有一定的分子生物学理论和操作经验,能够及时发现和纠正操作过程中的错误。连接酶链反应(LCR)是1989年才出现的一种核酸扩增试验,它与PCR不同之处是采用了两对寡核苷酸引物,它们与靶DNA碱基配对,结合于其上,然后连接酶将它们连接起来。此连接产物的顺序与靶NDA顺序相同。连接产物变性后,可作为引物的模板,通过变性-复性-连接20~30个循环,将连接产物扩增几十万倍以上。用生物素和碱性磷酸酶标记物后可直接对扩增产物进行检测。

4.血清学试验 人体感染生殖道沙眼衣原体后,产生相对应的抗体,但血清学试验的诊断价值有限。