一般采用靶细胞（HIV阴性者外周血淋巴细胞，PBMC）与受检者标本（PBMC、全血、血浆、精液及其他体液）共培养的方法，最常用的方法是PBMC共培养。

1．靶细胞制备 取HIV阴性者的抗凝全血，采用密度梯度离心的方法分离PBMC，并在含有适量天然白细胞介素-2（IL-2）和植物血凝素（PHA P）的培养基中培养3日，使淋巴细胞由静止状态充分活化。

2．建立共培养 将靶细胞与待检样本混合，在合适的条件下培养，培养过程中适时换液或补加新鲜靶细胞，维持培养28日。

3．监测病毒生长 定时取适量培养上清液，检测HIV-1P24抗原或反转录酶活性；也可定期观察细胞的形态，看有无HIV特征性的合胞体或其他细胞病变。

4．病毒鉴定 取培养上清液提取纯化RNA，或取共培养的PBMC提取纯化基因组DNA，用PCR方法扩增HIV-1特征性基因片段，对扩增阳性的片段进行基因序列测定。

5．判定结果和解释 培养上清液P24抗原或反转录酶连续2次呈阳性反应、并有P24抗原含量／反转录酶活性升高，或同时出现HIV特征性细胞病变，并经鉴定为HIV基因序列，判为HIV -1分离阳性；培养上清液P24抗原或反转录酶始终为阴性，判为HIV -1分离阴性。HIV-1分离培养阳性可以确证为HIV -1感染，分离培养阴性不能排除HIV-1感染。