二、HIV抗体检测

（一）常规HIV抗体检测的方法

HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验。

1．筛查试验 筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准，其中酶联免疫试剂应批批检合格。样品可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液样品。

2．筛查方法

（1）酶联免疫吸附测定（ELISA）：可使用血液、唾液、尿液样品，ELISA多为单纯HIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV -1P24抗原和HIV -1／2抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。

（2）化学发光或免疫荧光试验：这类试剂采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。

（3）快速检测（RT）及其他检测试验

明胶颗粒凝集试验（PA）：将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用。当待检样品含有HIV抗体时，明胶颗粒与抗体发生凝集反应，根据凝集情况判读结果。PA试剂有两种：同时检测HIV 1和HIV-2抗体及分别检测HIV-1和HIV-2抗体。

免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：均以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上，加待检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。

免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线状固定在膜上，待检样品（血液或唾液）沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。

3．筛查试验结果报告 HIV抗体筛查试验阴性反应报告为“HIV抗体阴性（－）”；阳性反应报告为“HIV抗体待复检”。

（二）确证试验

试剂必须是经国家食品和药品监督管理局注册批准。确证样品可采用血清、血浆、滤纸干血斑样品。确证方法包括免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）等。

1．常规试验为免疫印迹试验 硝酸纤维试剂膜条上结合了天然灭活HIV-1型蛋白的分离颗粒和特异性的HIV-2型合成多肽。硝酸纤维试剂膜条分别与加入稀释的血清或血浆样本和对照孵育。如果样本中含有HIV-1和HIV -2型的特异性抗体，则抗体会与试剂膜上的HIV-1蛋白和HIV -2多肽结合，通过清洗去除试剂膜上的未结合物，与HIV蛋白特异性结合的抗体再通过与带有碱性磷酸酶的羊抗人IgG抗体结合，加入BCIP／NBT底物等一系列反应即可显色。

2．HIV抗体确证试验结果的判定

（1）HIV -1抗体阳性：同时符合以下2条标准可判为HIV -1抗体阳性。①至少有2条env带（gp41和gp160／gp120）出现，或至少1条env带和p24带同时出现；②符合试剂盒提供的阳性判定标准。

（2）HIV -2抗体阳性：出现HIV-2型特异性指示带的样品：如果同时呈HIV-1抗体阳性反应，报告HIV -1抗体阳性，不推荐进一步做HIV -2抗体确证试验；如果同时呈HIV -1抗体不确定或阴性反应，需用HIV-2型确证试剂再做HIV-2的抗体确证试验。同时符合以下2条标准，即出现至少2条env带（gp36和gp140／gp105），和试剂盒提供的阳性判定标准，可判为HIV-2抗体阳性。

（3）HIV抗体不确定：出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。①HIV-1抗体特异带包括：env带：gp160／gp120、gp41；gag带：p55、p24、p17（或p18）；pol带：p66（或p65）、p51、p31。②HIV-2抗体特异条带包括：env带：gp140／gp105、gp36；gag带：p56、p26、p16；pol带：p68、p53、p34。（由于使用的毒株不同，HIV-2env带也可为gp125／gp80、gp36）。

（4）HIV抗体阴性：无HIV抗体特异带出现。

3．确证试验结果报告 符合HIV-1抗体阳性判断标准，报告“HIV-1抗体阳性（＋）”；符合HIV-2抗体阳性判断标准，报告“HIV-2抗体阳性（＋）”。符合HIV抗体阴性判断标准，报告“HIV抗体阴性（－）”。如疑似“窗口期”感染，建议进一步做HIV核酸检测。符合HIV抗体不确定判断标准，报告“HIV抗体不确定（±）”，在备注中应注明“4周后复检”。