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药用植物学
1.19.3.3 三、外源基因整合及表达的检测
三、外源基因整合及表达的检测

基因转化操作后,外源基因是否进入受体植物细胞,进入植物细胞的外源基因是否整合到植物染色体上,整合到染色体上的外源基因是否表达及能否获得预期的目的表型,都需要进行检测分析。对于外源基因整合最有效的检测方法是PCR与Southern杂交技术等分子生物学方法;对于外源基因的表达包括转录水平即m RNA和翻译水平即特异蛋白质检测,主要使用的方法有酶反应法、酶联免疫法(ELISA)和Western杂交技术以及生物学活性的检测。

对转基因植物的确定应有下列主要标准:①须有严格的对照和相应的比较分析。②提供转化当代植株的外源基因整合和表达的分子生物学证据,包括物理数据(PCR、Southern杂交、原位杂交、Western杂交)与表型数据(酶活分析),它们之间应紧密相关。③提供外源基因控制的表型性状证据(抗病虫害、抗寒)。④应有目的基因控制的表型性状稳定地遗传给后代的证据。