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眼视光学
1.5.4.2.3 三、共焦显微镜的临床应用
三、共焦显微镜的临床应用

1.正常人角膜的CM表现(图9-34~9-37) 表层上皮细胞边界清,并可见高亮度的细胞核,在紧邻其下的基底上皮层可见基底神经丛;在暗的角膜基质背景下仅见细胞核及细胞突,这种细胞突可能于特定的病理条件下(如水肿或细胞激活时)出现。另外,与中部及深部(细胞密度很低)基质相比,前部基质中存在大量角膜基质细胞;基质中神经纤维明显可见,三维下可见其长距离的走行;内皮细胞图像与角膜内皮镜检查所得图像很相似。

2.PRK术后CM表现 术后早期上皮发生不规则改变;角膜基质细胞数于术后2d即增多,细胞体积变大,1个月时达到高峰,6个月时细胞数量降到正常水平,但术后1年细胞仍比正常大1倍;上皮下沉积物的出现略晚于角膜基质细胞的改变,大多数患者于2周时发现,高峰期在1~3个月,以后逐渐减少,这些物质可能是被激活的角膜基质细胞、上皮细胞、或二者兼有。研究表明上皮及角膜基质细胞的改变仅在短期内暂时引起视力下降,而上皮下沉积物可能会对视功能产生长远影响。

PRK术后长期的角膜改变不只发生在紧邻上皮下的角膜基质,也会影响到深层基质;前部基质中角膜基质细胞密度在术后1~4个月达到高峰,而中央、后部基质细胞密度及角膜内皮细胞密度则不受影响。

图9-34 角膜上皮细胞

图9-35 角膜神经纤维

图9-36 角膜基质

图9-37 角膜内皮细胞

图9-38 LASIK术后6个月角膜基质层

a.碎片;b.角膜细胞

3.LASIK后CM表现(图9-38) 术后早期板层切口前后基质中可见宽的条纹,这可能与显微切开刀的震动有关;板层切口层面反光稍增强;角膜内皮表现为可逆性的类似于短时配戴角膜接触镜后的水疱状改变,可能与术中缺氧有关。内皮及基质条纹改变于术后9d内消失,而板层切口层面的反光界面消退较慢,于术后60d仍可观察到,大多数患者,角膜总反光强度并未增加。研究表明在CM下远离切削区域角膜仅发生暂时性变化。术后3个月在后半部角膜瓣及切削区后部基质的前半部分,即紧邻切削区的前后两部分角膜基质中基质细胞密度降低,12个月时仍较术前少,表明手术所导致的角膜基质细胞丢失在人角膜是不能完全被代偿的;另外在前半部角膜瓣中角膜基质细胞密度在术后12个月降低,这可能与失去神经支配后的营养因素有关;切削区后部基质的后半部分及深部角膜基质中基质细胞数目没有变化。

4.穿透性角膜移植术(PK)后的CM表现(图9-39~9-44) 术后8周于植片周边发现基质神经,术后7个月于植片中央的浅层及中基质层出现神经纤维,术后2年植片中央基底上皮才发现神经支配,研究表明CM能反映角膜神经支配的形态学与其功能的关系,PK术后角膜神经支配的恢复受术后经历的时间、患者的年龄和术前诊断的影响,所有患者在随诊阶段观察到的角膜神经在形态上及感觉上均异常,手术所致的瘢痕可能限制了植片神经的再生。

角膜基质细胞密度及数目在术后各个阶段均少于正常健康对照眼,角膜植片基质细胞密度在基质各层均减少。

图9-39 角膜上皮细胞之表层细胞

图9-40 角膜上皮细胞之翼状细胞

图9-41 角膜前弹力层

图9-42 角膜基质细胞

图9-43 角膜细胞

图9-44 角膜内皮细胞

5.角膜病诊断中的应用

(1)真菌性角膜炎:近年来真菌性角膜炎发病率不断提高,其常规诊断方法为刮片和真菌培养,前者阳性率低,后者需时较长,往往延误病情。角膜共焦显微镜见菌率可达96%,镜下可见不同形态菌丝、孢子,并能对菌丝的直径、长度及分支情况进行测量分析,整个过程只需2~3min。

(2)棘阿米巴角膜炎(图9-45、9-46):临床上对棘阿米巴角膜炎的诊断较困难,往往造成误诊,而共焦显微镜在诊断此病时已显示其无比优越的功能。角膜上皮下和浅基质层发现活动的滋养体和仅有12μm大小的包囊,这些包囊像白蚁蚀食角膜,在病变角膜区留下嵴、沟和洞样改变,这些均能在共焦显微镜的三维图加实时变化上清楚地显示出来。

图9-45 传统离体组织学检查(光学显微镜)

图9-46 角膜活体组织学检查(HRTⅡ)

(3)单纯疱疹性角膜炎:用共焦显微镜观察复发性单纯疱疹性角膜炎,能见到病变区上皮细胞的增大,浅基质层纤维化,上皮下神经丛在瘢痕组织中消失,证实了单纯疱疹性角膜炎角膜的敏感性下降与上皮下神经丛的减少有关。在深基质层瘢痕与正常角膜的交界处还可见到众多的微血管小支,这为全身免疫参与角膜基质炎的病理改变提供了病理解剖学的依据。

共焦显微镜与传统光学显微镜相比虽有许多优点,但仍存在不足之处,如受眼局部运动、心跳等影响,致成像不清晰;仍然是一种接触性检查法,操作不便等。共焦显微镜对许多角膜疾病的研究有待进一步深入,以形成标准量化的诊断标准指导临床。