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眼视光学
1.5.4.2.1 一、基本原理
一、基本原理

图9-33 HRTⅡ海德堡共焦激光角膜显微镜

共焦显微镜是一个共聚焦显微镜系统,它应用一个摆动的光栅,将其安装在眼科显微镜的装置上,适用于分析眼前节组织的细胞层。用常规的显微镜检查透明的、结构精细的组织时,聚集点之前或之后的层面会影响聚焦层面。因而,在正常情况下无法观察这些组织。利用共聚焦显微镜,就可直接观察到这些组织的精细结构。光线通过前置透镜的一半照射到角膜上,大部分集中在焦点范围内。为减少散射光,仅有很少的角膜组织被照亮。一小束裂隙状的照明光照射到角膜上,近似一个裂隙灯。少量的反射光线通过前置透镜的另一半及另一个与照射裂隙大小和光学性质相同的光栅。最后,这些图像投射至一个高敏度CCD相机并用PC控制器显示出来。经过这些光学处理,所有不需要的、来自非聚焦组织层的光线就可被第2个光栅滤除(仅有经过光栅的光线是同开放的光栅共轭的)。为了观察较大些的范围,可移动光栅对角膜进行扫描。还可以提高放大率分别显示不同层次的透明角膜组织结构。

如以HRTⅡ海德堡共焦激光角膜显微镜(图9-33)为例,以共焦激光作为光源,进行角膜活体组织学检查,其激光光源波长为670nm,有多种图像获取模式:①单幅图像;②纵向断层扫描,显示断层角膜结构;③Z-轴向后40幅图像动态连续扫描,每幅图像间隔2μm,总扫描深度80μm,同一断层平面动态连续记录图像10幅/s,水平/纵向分辨率:1μm,放大倍率:800x,观察视野:400μmx400μm,自动图像分析和细胞计数。