正如前述，体外培养的动物细胞有的可在悬浮状态下生长，有的必需贴附在某些基质上才能生长，有的则在两种条件下都能生长。因此相应地在生产过程中就要根据所采用的细胞特点，采用最适用的培养方法和操作方式，以获得最高的生产效率和最大的经济效益。                   

一、动物细胞大规模培养的方法     

    从生产实际看，动物细胞的大规模培养主要可分为悬浮培养，贴壁培养和贴壁—悬浮培养。

1．悬浮培养（suspension culture）

2．贴壁培养（anchorage-dependent culture）

3．贴壁—悬浮培养，或称假悬浮培养（pseudo-suspension culture）

    如上所述，悬浮培养和贴壁培养都有一定的优点和不足，那么能否将两者结合，优势互补，形成一种更理想的、更适于工业化大规模生产的培养方法呢？下面将介绍几种主要的两者结合的培养方法。

（1）微载体培养（microcarrier culture）

（2）包埋（entrapment）和微囊（microencapsulation）培养    该培养方法与微载体的不同之处，在于细胞不是贴附在载体表面，而是被包埋或包裹在凝胶载体或微囊内。有时包埋的凝胶载体较大，故又被称为巨载体（macrocarrier）培养。

（3）结团培养（aggregate culture）

该方法的实质是用细胞本身作为基质，相互贴附后，再用悬浮的方法进行培养，所以它也是一种贴附—悬浮培养。在实际使用中，有时为了加速细胞的结团，可先在培养基内加入一些直径较小的微粒（20μm±），促使细胞先附着其上，再相互附着。用该方法与微载体培养的不同是，用量小，细胞不能在载体上伸展，细胞呈球形。该培养方法的优点是操作简便，节省了用于微载体的成本。    

     二、 动物细胞培养的操作方式  

无论是悬浮培养、贴壁培养或贴壁—悬浮培养，其操作方式与培养细菌一样，一般可分为分批式（batch）操作、补料—分批（或流加式）（fed-batch）操作、半连续式（semi-continuous）操作、连续式（continuous）操作和灌流式（perfusion）操作。

1．分批式操作

在利用动物细胞生产药品中分批式操作大致有两种情况，一种是将细胞和培养基一次性加入反应器内进行培养，此后细胞不断增长，产物不断形成和积累，最后将条件培养基（conditioned medium）, 即经培养已含有细胞产物的培养基，或连同细胞一并取出，培养结束。另一种是先将细胞和培养基加入反应器，待细胞生长至一定密度后，往反应器内加入诱导剂或病毒等，经一段时间作用后，将反应物取出。

2．半连续式操作

该方式是当细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，取出部分培养物，或单纯是条件培养基，或连同细胞、载体一起，然后补充同样数量的新鲜培养基，或另加新鲜载体，继续培养。

3．灌流式操作

该方式是当细胞和培养基一起加入反应器后，在细胞增长和产物形成过程中，不断地将部分条件培养基取出，同时不断地补充新鲜培养基。它与连续式操作不同之处在于取出部分条件培养基时，绝大部分细胞仍保留在反应器内，而连续式培养则同时也取出部分细胞。该操作方式是近代用动物细胞培养生产各种药品中最被推崇的方式。

一、多项选择题

1. 动物细胞的大规模培养主要可分为______。
A.悬浮培养
B.假贴壁培养
C.贴壁培养
D.假悬浮培养
【答案】 ACD

2. 动物细胞培养的操作方式，一般可分为______。
A.分批式操作
B.流加式操作
C.半连续式操作
D.连续式操作
【答案】 ABCD

3. 动物细胞大规模培养的方法中, 属于贴壁—悬浮培养结合的方法是______。
A.微载体培养
B.结团培养
C.微囊
D.包埋
【答案】 ABCD