生物技术制药(2025春)

沈阳药科大学 夏焕章 倪现朴

目录

  • 1 绪论
    • 1.1 课程介绍
    • 1.2 生物技术制药
  • 2 基因工程制药
    • 2.1 概述
    • 2.2 目的基因的获得
    • 2.3 基因工程工具酶
    • 2.4 基因工程载体
    • 2.5 目的基因与载体链接
    • 2.6 重组载体的转化
    • 2.7 重组子筛选
    • 2.8 PCR技术
    • 2.9 琼脂糖凝胶电泳
    • 2.10 宿主菌的选择
    • 2.11 大肠杆菌中的基因表达
    • 2.12 基因工程菌的不稳定性以及对策
    • 2.13 重组工程菌的培养
    • 2.14 基因工程药物的分离纯化
    • 2.15 变性蛋白的复性
    • 2.16 基因工程药物的质量控制
    • 2.17 基因工程药物的制造实例
  • 3 动物细胞工程制药
    • 3.1 动物细胞制药概述
    • 3.2 动物细胞的形态和生理特性
    • 3.3 生产用动物细胞的要求和获得
    • 3.4 动物细胞的培养条件
    • 3.5 动物培养基的种类和组成
    • 3.6 动物细胞大量培养的方法和操作方式
    • 3.7 动物细胞制药的应用
    • 3.8 动物细胞的核移植技术
  • 4 抗体制药
    • 4.1 抗体制药概述
    • 4.2 单克隆抗体
    • 4.3 抗原与动物免疫
    • 4.4 细胞融合与杂交瘤细胞的选择
    • 4.5 杂交瘤细胞性状鉴定
    • 4.6 基因工程抗体及其制备
    • 4.7 抗体工程
    • 4.8 抗体应用实例
  • 5 酶工程制药
    • 5.1 酶工程简介
    • 5.2 酶的来源
    • 5.3 固定化酶与固定化细胞的制备
    • 5.4 固定化酶与细胞的性质评价指标
    • 5.5 酶的人工模拟
  • 6 发酵工程技术概论
    • 6.1 高密度发酵
    • 6.2 基因工程在提高发酵产量中的应用
    • 6.3 基因工程在改善发酵组分中的应用
    • 6.4 基因工程在改进发酵生产工艺中的应用
    • 6.5 基因工程在产生杂合抗生素中的应用
大肠杆菌中的基因表达

一、包涵体形成的原因
包涵体形成的原因主要是高水平表达的结果。
包涵体虽然由无活性的蛋白组成,但包涵体形成对于重组蛋白的生产也提供了几个优势:
1.包涵体具有高密度,易于分离纯化;
2.重组蛋白以包涵体的形式存在有效地抵御了大肠杆菌中的蛋白酶对目的蛋白的降解;
3.对于生产那些处于天然构象时对宿主细跑有毒害的蛋白时,包涵体形成无疑是最佳选择。
二、包涵体的分离和溶解
1.包涵体的分离
2.包涵体的溶解
三、包涵体蛋白复性方法
一个有效的、理想的折叠复性方法应具备以下几个特点:
① 活性蛋白质的回收率高;
② 正确复性的产物易于与错误折叠蛋白质分离;
③ 折叠复性后应得到浓度较高的蛋白质产品;
④ 折叠复性方法易于放大;
⑤ 复性过程耗时较少。
1.稀释、透析复性法
2.含二硫键的蛋白的复性
3.封闭蛋白的疏水簇促进复性
4.凝胶过滤层析复性
5.小分子添加剂促进的复性
6.分子伴侣或折叠酶促进的复性
7.人工分子伴侣促进的复性

(美)那伊,(美)阿凯尔斯主编,童望宇等译. 蛋白质药物:开发与生产. 化学工业出版社, 2006