吸光光度分析及误差控制

一、测定波长选择

        选择原则：“吸收最大，干扰最小”。

二、参比溶液选择

        参比溶液：用于仪器调零，消除吸收池壁和溶液对入射光的反射或吸收带来的误差，扣除干扰。

        1、溶剂参比

        ——试样简单、共存其它成分对测定波长吸收弱，只考虑消除溶剂与吸收池等因素；

        

        2、试样参比

        ——如果试样基体溶液在测定波长有吸收，而显色剂不与试样基体显色时，可按与显色反应相同的条件处理试样，只是不加入显色剂。

        

        3、试剂参比

        ——若显色剂或其它试剂在测定波长有吸收，按显色反应相同的条件，不加入试样，同样加入试剂和溶剂做参比。

        

        4、平行操作参比

        ——用不含被测组分的试样，在相同条件下与被测试样同时进行处理。

   

三、标准曲线的制作

        标准曲线：用于定量分析。基于朗伯-比尔定律，A～c 成正比。测定一系列不同含量的标准溶液的吸光度，以吸光度 vs 待测组分含量作图，得到一条通过原点的直线。在同样条件下测得待测溶液吸光度，可通过标准曲线查到相应的含量值。

四、对朗伯－比尔定律的偏移

        在实际测量中发现，A与b总是成正比，但A与c并不总是成正比，导致朗伯－比尔定律的偏离。比如：

        1、光学因素——非单色光、非平行光引起的偏移

        ① 非单色光

        单色器提供的单色光λ0 是具有一定的通带宽度，△λ（即带宽）。

        非单色光的吸收，导致标准曲线不经过{0.0}点。

        ② 杂散光

        杂散光，不在谱带宽度范围内或与所需波长相隔较远的光。

        一台高质量的紫外可见光光度计，杂散光应很小；在仪器光谱感应区的极端，杂散光引起的误差较大；高吸光度时，杂散光引起的相对误差大。

        ③ 散射光和反射光

        ④ 非平行光

        非平行光，导致标准曲线不经过{0.0}点。

        2、溶液物理化学因素——非均匀介质及化学反应（浓溶液）

        ① 化学反应

        ② 非均匀介质

        ③ 干扰物质

        3、消除干扰因素

        控制酸度，加入掩蔽剂，调整干扰离子价态，合适的参比溶液，优化显色条件，分离

五、吸光度测量的误差

        在分光光度计上，吸光度读数的标尺刻度不均匀

        测量吸光度，导致的相对误差计算如下：

        相对误差Er vs 透过率T曲线：

        图上：A＝0.434，T＝36. 8%时，测量的相对误差最小。

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