实验四  香菇多糖的制备与测定

实验目的

1）学习香菇多糖的制备方法。

（2）掌握多糖含量的测定方法。

一 实验原理

在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结合，所以在生化产品制备工艺中，往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开，以促进多糖在提取时的溶解。碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶处理组织。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当调pH和加热等。

二、实验材料和试剂

试剂：氯仿、正丁醇、医用纱布、工业酒精、蒸馏水

三、实验步骤

1. 2g干香菇切成小块，以1：10（重量比）加入水，用捣碎机进行均质；

2. 取20mL均质液放入250mL烧杯中，再加入50mL蒸馏水，加热至沸后，温火煮沸1小时，（注意：煮沸过程中用玻璃棒不断搅拌，以免烧杯底部发生糊结；并间歇加入少量水，使杯内液体体积保持在50mL左右；

3. 加热完毕后，将杯内液体用8层纱布过滤，除去残渣，上清液转入另一烧杯中；

5. 将上清液在1×10000g离心10min，将上清液转入另一烧杯，除去残渣；

6. 上清液中加入等体积的氯仿正丁醇浓液（体积比为4：1），搅拌5min，静置30分钟；

7. 将混合液体在1×5000g下离心20min,分离水相；

8. 在水相中加入终浓度为80%的酒精，搅拌均匀，静置20min，1×5000g下离心10min；

9. 取出沉淀物，放入已称重的干燥表面皿中，在真空干燥箱中80℃下真空干燥；

10. 干燥后，称重，计算多糖的产率；（苯酚硫酸法测含量）

四、结果分析

五、思考题

1、怎么提高第一步中的香菇的均质的效果？

2、氯仿、正丁醇、酒精在每步的作用是什么？

3、香菇多糖提取采用的是什么方法？

4、水相中加入终浓度为80%乙醇，该如何加入？