实验七 从鸡蛋黄中提取胆固醇、卵磷脂、脑磷脂

一、实验目的

掌握胆固醇、卵磷脂、脑磷脂分离提取工艺

二、实验原理

   利用卵磷脂、脑磷脂不溶于丙酮的性质，用丙酮萃取除去胆固醇。根据卵磷脂，溶于乙醇，脑磷脂不溶于乙醇的性质，将二者分离。溶于乙醇的卵磷脂，回收部分乙醇后，用丙酮将其从溶解液中沉淀出来，黄色蜡状物即为卵磷脂成品。卵磷脂在乙醇中的溶解度随温度及浓度的不同而有所差异.不溶于乙醇的脑磷脂，根据其溶于乙醚的特性，将其溶解、过滤，弃去滤饼，最后反复经乙醚提纯，乙醇沉，直至溶解在乙醚中，不再产生沉淀为止，最后通过冷冻高速离心(4 ℃，8 000 r/min)收集沉淀物，即为脑磷脂。

三、实验器材

1离心机

2烘箱

3蒸馏回收装置

4真空干燥箱

四、材料与试剂

丙酮 鸡蛋 乙醇 碳酸钠 滤纸 纱布 氯化钙 刮刀

五、操作方法

（一）从鸡蛋黄中提取胆固醇

胆固醇（cholesterol），又称为胆固5-烯-3β-醇，是胆烷醇5，6位脱氢后生成的化合物。它的分子式为C27H46O，分子量为386.66，熔点147-150℃。

胆固醇是高等动物体申的主要淄醇，是细胞膜脂质的成分之一，主要在肝脏中合成。动物组织中胆固醇含量以脑组织为最多，在肝、骨、胰脏、脾和胆汁中较多，心脏次之。猪脑和蛋黄中胆固醇含量高达2%，因此可作为综合利用提取胆固醇的原料。

1、操作步骤

原料处理:将鸡蛋送人-10℃冷库内，使蛋的内容物凝固，然后取出，打开蛋壳，将蛋黄分离出来，集中在烧杯中。将上述蛋黄原料放人烘箱或烘房内，在55℃下烘6h左右便成干燥状态，研磨成粉末，贮存备用。

提取:将以上蛋黄粉放烧杯中，加入1倍左右的冷丙酮，搅拌lh。然后以4000-5000r/nin的速度离心30min，收集离心液。滤渣再加丙酮重复提取1次，最后合并2次离心液，滤渣作提取卵磷脂和脑磷脂用。

浓缩:将以上离心的丙酮脱脂液抽入蒸发罐中，尽量蒸发，回收丙酮，也可以将滤液在56-58.5℃浓缩至原体积的1/10，回收的丙酮可用于提取胆固醇。

沉淀:将滤渣加入95以上乙醇适量（按蛋黄量加入1-1.5倍乙醇），沸至全部溶解后放出，冷却至室温，于5℃以下静置24h，用双层纱布过滤收集晶体。于结晶中加入2-3kg碳酸钠和50-60℃热水适量，静置片刻后得胆固醇粗品。

精制:取胆固醇粗品适量，加10倍量95%乙醇和2%-2.5%（按100ml溶液加2-2.5g计)左右的活性炭，加热回流30min，用双层滤纸保温过滤。冷至室温后，于5℃以下静置24h，使结晶完全。趁冷真空抽滤或甩干，95%冷乙醇洗涤，70-80℃于燥，即得精品，装于棕色瓶中保存。成品率为4%。

（二）乙醇冷浸法工艺提取卵磷脂

1、操作步骤

浸提  从1（2）中得到的滤渣加入95%乙醇，使醇浸掖的液面务必高出原料面约3cm，边加边搅，乙醇加完后，再继续不断地搅拌1h，然后放在室温下使其继续浸泡过夜。

吸取浸液  浸泡一段时间后，醇浸液中的蛋粉徐徐沉淀，待其全部沉淀后，便可采用倾泻法、虹吸法或勺取法将金黄色的醇浸液吸取出来。浸液吸出后，沉淀物中仍有一部分浸液，可进行过滤，然后将所得的浸液再次用滤纸过滤，加盖，放于低温处贮存，准备集中蒸馏浓缩。

蒸馏浓缩:  来用一般的蒸馏方法进行。因乙醇的沸点为78.4℃，故当水浴加热到78-80℃时，醇液便变为蒸气，由分馏柱进人冷凝管，再变成液体而积存于接受瓶中。继续蒸馏至蒸馏瓶中残液呈浑厚油状物，而冷凝管中已不再滴出回收醇液时，即可停止蒸馏。

沉淀清洗: 将蒸馏瓶中残余的油状液倾人烧杯里，加人油状液容积2倍的丙酮，并用玻棒凋和。静置，待其分层后，将上层混浊的丙酮洗液倾出，再加人等量的丙酮，如法洗净，静置，待其产生沉淀再倾去丙酮洗液，如此重复洗净2-3次，使蛋黄油脱净，然后将淡黄色沉淀收集起来。

干燥:将沉淀用刮刀刮下，平铺在瓷盘上，厚度不宜超过1.5cm，干燥箱内，箱内温度应保持在25-30℃，这样经过24-48h烘干，便是干燥的卵磷脂。

（三）脑磷脂的抽提

脑磷脂（cephalin）是自牲畜脑及脊髓中提取的磷脂酸和乙醇胺（胆胺）的复合甘油磷脂，又称磷脂酰乙醇胺或乙醇胺磷脂。最早于1884年命名，是指脑脂质中不溶乙醇而可溶于乙醚的组分，主要成分是磷脂酰乙醇胺，也含有磷脂酰丝氨酸及磷脂酰肌醇。应用于局部止血、神经衰弱、动脉粥样硬化、肝硬化和脂肪性病变。羊脑磷脂可做肝功能诊断试剂。

操作步骤

把经乙醇提取后的沉淀滤渣移入搪瓷缸，加等量左右的乙醚，搅拌提取12h，离心分离上清液。浓缩提取液至原体积的1/3，在0℃左右静置12h。于离心机上分出上层清液，在上层清液中加入1倍左右95%的温乙醇，静置沉淀。重复"乙醚溶解→乙醇沉提"几次，最后过滤，收集沉淀，干燥即得脑磷脂成品。

六、思考题

1. 整个分离提取工艺应注意的事项有哪些？

2. 三种物质分离的原理是什么？